CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna ad 5

Analiza Western blot przy użyciu przeciwciał monoklonalnych CEACAM6 klon 9A6 i anty – aktyna. Dziesięć mikrogramów całkowitego białka z różnych linii komórek nabłonka jelitowego wprowadzono do 4%> 12% żelu Tris-glicynowego. (B) Analiza mikroskopowa konfokalna zróżnicowanych komórek Caco-2 zakażonych bakteriami LF82 eksprymującymi GFP. Oryginalne powiększenie, × 400. CEACAM6 wykrywano przy użyciu klonu monoklonalnego anty-CEACAM6 9A6 i sprzężonej z czerwienią Texas anty-mysiej IgG (górny panel). Strzałki pokazują kolokalizację (żółty) pomiędzy CEACAM6 i bakteriami. Rekonstrukcja 3D (dolny panel) wykazała szczytową ekspresję CEACAM6 (czerwony) i adherentnych bakterii (zielony). (C) Analiza Western blot pokazująca poziomy ekspresji CEACAM6, CEACAM5 i CEACAM1 przez komórki Caco-2 po 48 godzinach stymulacji IFN-y lub TNF-a lub po 3-godzinnym okresie infekcji bakteriami AIEC LF82 o MOI równym 10. Jako kontrola obciążenia, przeprowadzono znakowanie stosując przeciwciała poliklonalne anty-aktyny (D) Zdolność do adhezji bakterii AIEC LF82 oznaczono ilościowo po 3 godzinach okres infekcji przy MOI wynoszącym 10 w komórkach nabłonka jelit Caco-2 po i 2 dniach IFN-y stymulacja. W celu wyciszenia RNA stymulowane IFN – a komórki Caco-2 transfekowano 10 ng blokującego siRNA CEACAM6 (siRNA CEACAM6) lub 10 ng nieaktywnego siRNA (siRNA kontrolnego). Ekspresję CEACAM6 analizowano za pomocą analizy Western blot przy użyciu klonu monoklonalnego anty-CEACAM6 9A6 lub przeciwciał poliklonalnych anty-aktyny. * P <0,05 w porównaniu z niestymulowanymi komórkami Caco-2; P <0,05 w porównaniu z komórkami Caco-2 stymulowanymi przez 2 dni za pomocą IFN-y i nietransfekowane lub transfekowane siRNA kontrolnym. IFN-. lub TNF-a pobudzenia, ale nie infekcji LF82, słabo indukowanego CEACAM5 w komórkach Caco-2, podczas gdy nie obserwowano ekspresji CEACAM1 (Figura 5C). IFN-. silnie zwiększona ekspresja białka CEACAM6 i, w mniejszym stopniu, TNF-a również zwiększyła ekspresję CEACAM6. Co ciekawe, wzrost poziomu białka CEACAM6 obserwowano w komórkach Caco-2 po 3 godzinach infekcji szczepem AIEC LF82 przy MOI wynoszącym 10 (Figura 5C). Ponadto ani infekcja LF82, ani IFN-y lub TNF-a stymulacja wywołała ekspresję CEACAM6 na komórkach nabłonka jelita Colo205, SW480 i HCT-116, w których nie wykryto endogennego białka CEACAM6 (dane nie pokazane). Wskazuje to, że stany zapalne lub infekcje chorobotwórczymi bakteriami mogą indukować ekspresję CEACAM6 tylko w komórkach nabłonka jelita eksprymujących CEACAM6 na poziomie podstawowym. Wreszcie, zdolność szczepu AIEC LF82 do przylegania do komórek Caco-2 była znacząco zwiększona w sposób zależny od dawki, gdy indukowano ekspresję CEACAM6 po i 2 dniach IFN-y. stymulacja (Figura 5D). Ponadto efekt ten był odwrócony w obecności siRNA CEACAM6, podczas gdy siRNA kontrolne, które nie obniżało poziomu białka CEACAM6, nie miało wpływu na adhezję AIEC LF82 (Figura 5D). Łącznie odkrycia te pokazują, że poziom adhezji AIEC wzrasta wraz z ekspresją CEACAM6 przez komórki nabłonka jelitowego. Dyskusja Pokazujemy, że szczepy AIEC związane z CD przywierają do granicy szczoteczki pierwotnych enterocytów jelita krętego przygotowanych od pacjentów CD, ale nie do enterocytów z grupy kontrolnej bez IBD. W normalnych ludzkich jelitach, komensalne E. coli nie są w stanie przylegać do wierzchołkowej powierzchni komórek nabłonka jelitowego. Jedynie patogenne E. coli, które nabyły w wyniku przeniesienia poziomego geny wirulencji kodujące czynniki adhezyjne, mają zdolność przylegania do wierzchołkowej powierzchni zróżnicowanych komórek nabłonkowych jelit. Na przykład, enterotoksyczna E. coli (ETEC) syntetyzuje specyficzne czynniki adhezyjne zwane antygenami czynnika kolonizacyjnego (CFA) (22), które specyficznie wiążą asialogangliozyd GM1 wyrażany na granicy szczoteczki enterocytów jelita cienkiego (23, 24). W bardziej specyficzny sposób enteropatogenne E. coli (EPEC) lub enterohemorytmiczne E. coli (EHEC) wykorzystują maszynerię sekrecyjną typu III do przyłączania się do nabłonkowych komórek jelitowych, translokując własny receptor do intymnego przyłączenia (translokowany receptor intimin [Tir]) w komórka gospodarza, która następnie wiąże się z intimin na powierzchni bakterii (25, 26). Wreszcie, adhezy Afa / Dr dyfuzyjnie przylegających E. coli (DAEC) umożliwiają bakteriom wiązanie się z ludzkim czynnikiem przyspieszającym rozkład (DAF) lub cząsteczkami antygenów rakowo-płodowych (27). Wcześniej informowaliśmy, że szczepy AIEC nie posiadają żadnego z genów kodujących znane czynniki przyczepne patogennych szczepów E. coli uczestniczących w infekcjach jelitowych lub pozajelitowych, ale wyrażają pilus typu (9, 14). Pili typu są pospolitymi bakteryjnymi przydatkami, a adhezyna FimH położona na końcu struktury włókienkowej może pośredniczyć w przyleganiu bakterii do nieglikozylowanych receptorów gospodarza, w tym związanych z matrycą kolagenu typu I i IV, lamininy i fibronektyny, i do receptorów glikozylowanych ( 28) [podobne: polskie towarzystwo ultrasonograficzne, badanie kału na pasożyty, zst kolbuszowa ] [patrz też: wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego, zss kolbuszowa dolna ]