CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna cd

Mikroskopia kontrastu fazowego i znakowanie fluorescencyjne z użyciem ConA-FITC enterocytów jelita krętego od pacjenta z CD i kontroli. Oryginalne powiększenie, × 400. Tabela Zdolność różnych szczepów AIEC i odpowiadających im mutantów fimH do przylegania do granicy szczoteczki pierwotnych enterocytów jelita krętego wyizolowanych od pacjentów z CD szczepów AIEC wyrażonych odmianami pili typu 1. Poziom adhezji AIEC LF82 eksprymującej taki wariant pili typu był znacznie wyższy niż niepatogennego szczepu K-12 E. coli, w którym indukowano nadekspresję regularnego pili typu (Figura 2C). Nie było to spowodowane różnicami w ekspresji pilusa typu 1, ponieważ analiza Western blot ujawniła podobne ilości ekspresji pilusa typu w tych 2 szczepach (Figura 2C). Aby potwierdzić większą zdolność pili LF82 typu w porównaniu z pilusami K-12 typu 1, opracowaliśmy szczep AIEC LF82 z ekspresją pili E. coli K-12 typ 1. Szczep AIEC szczep LF82 eksprymujący P-12 typu był w stanie przylegać, ale w mniejszym stopniu niż wariant szczepu AIEC szczepu LF82 typu (Figura 2C). W celu dalszej analizy przyczepności szczepu AIEC LF82 do granicy szczoteczki enterocytów jelita krętego z ekspresją pili typu 1, enterocyty od pacjentów CD lub kontroli inkubowano ze znakowaną FITC konkanawaliną A (ConA), która wiąże się z mannozą. Wysoki poziom ConA wiąże się z granicą szczoteczką enterocytów od pacjentów CD, ale nie z enterocytami od kontroli (rysunek 2D). Wyniki te wykazują wysoką ekspresję mannozylowanej cząsteczki na powierzchni wierzchołkowej pierwotnych enterocytów jelita krętego u pacjentów z CD. Ekspresja cząsteczek 5 i 6 związanych z adhezją komórkową antygenu rakowo-płodowego jest podwyższona w biopsjach jelita krętego CD. Zgłoszono kilka glikozylowanych receptorów dla pilusów typu 1, takich jak zakotwiczone w glikozylowanej (zakotwiczone w GPI) białko glikozylofosfatydyloinozytolu (CDI), białko Tamm-Horsfall (THP) i różni członkowie rodziny cząsteczek adhezyjnych związanych z antygenem rakowo-płodowym (CEACAM) (16. 20). Analiza Western blot całkowitego ekstraktu białkowego z próbek jelita krętego 9 pacjentów z CD, pobranych w obu obszarach zaangażowanych i niezaangażowanych, oraz 9 kontroli wykazało silną ekspresję CEACAM5 (zwaną także CEA lub CD66e) i CEACAM6 (również zwaną CD66c lub non-cross -reaktywny antygen [NCA]) w błonie śluzowej jelita krętego u pacjentów z CD w obu obszarach zaangażowanych i niezaangażowanych (Figura 3A). Nie znaleziono żadnej ekspresji THP, CD48 lub CEACAM1 (dane nie pokazane). Bloty całkowitych lizatów komórkowych sondowano za pomocą ConA-HRP w celu określenia, jak wiele glikoprotein uległo podwyższeniu lub miało zwiększoną mannozę. Całkowita intensywność sygnału była wyższa w próbkach CD z jelita krętego w porównaniu z kontrolnymi (dane nie pokazane). Nie było jednak możliwe określenie liczby glikoprotein w górę w próbkach z jelita krętego CD. Podstawową ekspresję CEACAM6 obserwowano w błonie śluzowej jelita grubego u 3 pacjentów z kontrolą bez badanego IBD (Figura 3B). Nie obserwowano podwyższonej ekspresji CEACAM6 w błonie śluzowej okrężnicy, w przeciwieństwie do błony śluzowej jelita krętego u pacjentów z CD. Zaobserwowaliśmy również, że ekspresja CEACAM6 nie była podwyższona w okrężnicy pacjentów z UC (Figura 3B). Wyniki te wskazują, że regulacja w górę ekspresji CEACAM6 jest specyficzna dla odcinka jelita krętego jelita pacjentów z CD. Figura 3CEACAM6 ekspresja wspiera adhezję AIEC. (A) Analiza Western blot całych ekstraktów białkowych z biopsji jelita krętego pobranych w obu zaangażowanych i niezaangażowanych obszarach 9 pacjentów z CD i od 9 biopsji jelita cienkiego od kontroli z użyciem przeciwciał anty-CEACAM5, anty-CEACAM6 i przeciwciał anty-aktyna. (B) Analiza metodą Western blot całych ekstraktów białkowych z biopsji okrężnicy z 3 kontroli, 3 pacjentów z UC i 3 pacjentów z CD z zastosowaniem przeciwciał anty-CEACAM6 i anty-aktyna. (C) Wskaźniki przyczepności szczepu AIEC LF82 do granicy szczoteczkowej enterocytów od pacjentów CD w obecności przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko CEACAM1, CEACAM5, CEACAM6, THP i CD48. (D) Wskaźniki przyczepności szczepu AIEC LF82 do granicy szczoteczkowej enterocytów od 4 pacjentów CD w obecności przeciwciała monoklonalnego anty-CEACAM6. (E) Analiza mikroskopowa konfokalna komórek HeLa transfekowanych cDNA ludzkiego CEACAM6 klonowanego i zakażonego AIEC LF82 niosącego konstrukt GFP. Oryginalne powiększenie × 1,000. Ekspresję CEACAM6 wykrywano stosując przeciwciało monoklonalne anty-CEACAM6 i sprzężoną z Texu czerwienią koniugowaną anty-mysią IgG. Strzałki wykazują wyraźną kolokalizację (żółte zabarwienie) pomiędzy CEACAM6 i bakteriami. Bakterie AIEC LF82 rozpoznają receptor CEACAM6 na enterocytach jelita krętego. Wstępne leczenie enterocytów jelita krętego wyizolowanych od pacjentów CD z przeciwciałem monoklonalnym anty-CEACAM6 silnie zmniejszało adhezję LF82, podczas gdy wstępne traktowanie przeciwciałami monoklonalnymi anty-CD48, -CEACAM1, -CEACAM5 lub -THP nie miało wpływu na adhezję LF82 (Figura 3C)
[więcej w: syrop tymiankowy złożony, krem pod oczy z peptydami, suplementy na wypadanie włosów ]
[przypisy: redukcja tkanki tłuszczowej dieta, szkoła rodzenia madalińskiego, mleko z biedronki wycofane ]