Czynnik uwalniający histaminę ma prozapalną rolę w mysich modelach astmy i alergii ad 9

Wybarwiany barwnik 30 minut po ekspozycji na mHRF mierzono przez ekstrakcję uszu w formamidzie. Wszczepienie myszy KitWis / Shys z BMMC przeprowadzono na 6 tygodni przed eksperymentami (66). W niektórych eksperymentach, w których myszy stymulowano bez błękitu Evansa, zmierzono grubość ucha. Modele astmy. W pierwszym modelu (42) myszy C57BL / 6 uczulano przez wstrzyknięcie ip OVA (10 (Ig) w dniach 0, 7, 14, 21, 28 i 35. W dniach 40, 43 i 46 myszy w prowokacji OVA (20 .g). Niektóre myszy były wstępnie traktowane 40-400 .g GST lub GST-N19 przed każdą prowokacją OVA. W niektórych eksperymentach do wstępnej obróbki użyto 20 .g syntetycznego peptydu N19 lub nośnika (2% DMSO). 24 godziny po ostatnim prowokacji, czynność płuc badano przy użyciu systemu FlexiVent (SCIREQ). Myszy uśmiercono i zebrano płyny BAL oraz tkanki krwi i płuc. Komórki w płynach BAL wyliczono po barwieniu May-Giemsa. Zatopione w parafinie tkanki płucne barwiono H & E i kwasem nadjodowym Schiff. Cytokiny w homogenatach płuc oznaczano ilościowo za pomocą testu ELISA. W drugim modelu astmy (47) myszy BALB / c były leczone alergenem Aspergillus fumigatus (50 .l, Greer Laboratories) lub PBS 3 razy w tygodniu przez 3 tygodnie. Niektóre myszy były wstępnie traktowane GST lub GST-N19 (200 .g / 50 .l) rozpoczynające się w drugim tygodniu przez 30 minut przed każdą immunizacją. 24 godziny po ostatnim prowokacji myszy uśmiercono. W trzecim modelu (48) myszy C57BL / 6 immunizowano ip OVA w obecności ałunu w dniach 0 i 12. Myszy podawano z OVA (20 .g / 20 .l) w dniach 24, 26, i 28. Niektóre myszy wstępnie traktowano GST lub GST-N19 (400 .g / 20 .l) przed każdą prowokacją OVA. 24 godziny po ostatnim prowokacji myszy uśmiercono. Mikromacierz oligonukleotydowy. Całkowity RNA ekstrahowano z płuc przy użyciu zestawu RNeasy Total RNA Mini (Qiagen). Przeprowadzono analizę mikromacierzy przy użyciu 200 ng całkowitego RNA z każdej próbki i macierzy SurePrint G3 Gene Expression 8x60K (Agilent Technologies) zgodnie z instrukcjami producenta. Dane z mikromacierzy zostały zdeponowane w Gene Expression Omnibus (GEO, nr dostępu GSE34133, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/query/acc.cgi.acc=GSE34133). Analizę danych przeprowadzono za pomocą oprogramowania GeneSpring (wersja GX 10.3). Ponieważ poziomy ekspresji genów utrzymywania czystości (GAPDH i P -actin) nie różniły się pomiędzy wszystkimi próbkami, nie przeprowadzono specyficznej normalizacji. Aby wyeliminować geny zawierające tylko sygnał tła, geny zostały wybrane tylko wtedy, gdy surowe wartości. Wyrażenie. były ponad 100. Ponadto skupiliśmy się na sondach z niezawodnymi adnotacjami (https://earray.chem.agilent.com/earray/) w niniejszym badaniu. Łącznie 16 374 genów spełniło te kryteria i zostało poddanych dalszej analizie. Statystyka. Do analizy AHR zastosowano korektę Bonferroniego. Inne analizy statystyczne przeprowadzono za pomocą testu dwustronnego ucznia. Pokazane dane wskazują na średnią. SEM. Wartość AP mniejsza niż 0,05 została uznana za znaczącą. Zatwierdzenie badania. Eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komisję ds. Pielęgnacji i Używania Zwierząt w La Jolla Institute for Allergy and Immunology. Dodatkowe materiały Zobacz dodatkowe dane Podziękowania Podziękowania dla Jae-Youn Cho i Petera Rosenthala za doskonałą pomoc techniczną oraz Shane a Crotty ego i Howarda M. Graya za krytyczną lekturę tego manuskryptu. Badanie to zostało częściowo wsparte dotacjami z NIH (dla T. Kawakami) i Narodowego Instytutu Innowacji Biomedycznych (ID10-43, K. Matsumoto). Jest to publikacja 1262 z Instytutu Alergologii i Immunologii La Jolla. Przypisy Konflikt interesów: Tomomitsu Ozeki jest zatrudniony przez ULVAC Inc. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2012; 122 (1): 218. 228. doi: 10.1172 / JCI59072. Obecny adres Miho Kimury to: Departament Reumatologii i Chorób Zakaźnych, Kitasato University School of Medicine, Sagamihara, Japonia. Obecny adres Jiro Kitaura to: Wydział Terapii Komórkowej, Instytut Nauk Medycznych, Uniwersytet Tokijski, Tokio, Japonia.
[przypisy: wirusowe zapalenie krtani, niepokój manipulacyjny, polskie towarzystwo ultrasonograficzne ]
[podobne: suplementy na wypadanie włosów, zst kolbuszowa, kolbuszowa dolna ]