Czynnik VIII, który jest ektopowo ukierunkowany na płytki, jest terapeutyczny w hemofilii A z przeciwciałami hamującymi o wysokim mianie ad 5

W celu określenia działania przeciwciał hamujących u myszy 2bF8trans transgeniczne myszy otrzymywały osocze od immunizowanych myszy FVIIInull. Immunizacja myszy FVIIInull dała miana inhibitora tak wysokie jak 100 000 BU / ml po 3 dawkach immunizacji rhBDDFVIII podawanych z adiuwantem przez wstrzyknięcie ip. Wszystkie 16 myszy 2bF8trans wlewane do końcowego stężenia 2,5 lub 25 BU / ml z osoczem hamującym z immunizowanych myszy FVIIInull przeżyło przycinanie ogona, a 7 z 8 myszy, którym podawano infuzję do 250 BU / ml, przeżyło przycinanie ogona (Figura 4B). W doświadczeniach z transplantacją śledziony wszystkie myszy rozwinęły wysokie miana przeciwciał hamujących po rekonstytucji. W obecności 5 000 ~ 50 000 BU / ml, 5 z 7 myszy transgenicznych przeżyło przycinanie ogona, a 3 z 5 myszy transgenicznych przeżyło przycinanie ogona pomimo miana inhibitora powyżej 50 000 BU / ml (Figura 4C). Liczba płytek krwi u biorców po rekonstytucji (0,74. 0,20 × 109 / ml; n = 8) nie różniła się istotnie od liczby płytek krwi z pretransplantacji (0,69. 0,20 × 109 / ml, P = 0,62). Przebadaliśmy liczbę płytek krwi u 2 biorców przez 6 miesięcy, a liczba płytek krwi nie uległa zmniejszeniu, jednak ich miana inhibitorów pozostały większe niż 50 000 BU / ml. Oznacza to, że krążące przeciwciała hamujące FVIII w osoczu nie zakłócają prawidłowego wytwarzania płytek krwi lub przeżycia u tych myszy. FVIII: C nie wykryto w osoczu myszy WT otrzymujących komórki śledziony od immunizowanych myszy FVIIInull, chociaż ich FVIII w osoczu: C był prawidłowy przed otrzymaniem immunizowanych komórek śledziony i tylko 2 z 7 przeżyły przycinanie ogona z miana, które najbardziej (70% ) transgeniczne myszy mogą przezwyciężyć (Figura 4C). Po bezpośredniej immunizacji rhBDDFVIII raz adiuwantem myszy 2bF8trans wytworzyły przeciwciała hamujące. Liczba płytek krwi FVIII i całkowita liczba płytek krwi u tych myszy nie różniły się znacząco od poziomów preimmunizacji (dane nie pokazane). Wszystkie 6 immunizowanych myszy 2bF8ransów o mianie inhibitora 10 ^ 50 BU / ml przeżyło przycinanie ogona, a 7 z 9 myszy z mianami 51. 150 BU / ml przeżyło (Figura 4D). W ten sposób wykazaliśmy, że ekspresja FVIII pod kontrolą promotora A IIb zachowuje skuteczność w hemofilii A nawet w obecności inhibitorów o wysokim mianie wywoływanych przez 3 różne podejścia eksperymentalne. Dyskusja Chociaż podjęto próby terapii genowej dla hemofilii A u ludzi, nie osiągnięto jeszcze terapeutycznego poziomu FVIII (7, 17). Niepowodzenie to można częściowo przypisać temu, że żadne z tych podejść nie ukierunkowało syntezy FVIII na komórki, które syntetyzują i przechowują VWF, mimo że wiadomo, że VWF stabilizuje FVIII w osoczu (40) oraz w komercyjnej produkcji rekombinowanych produktów FVIII (41). , 42). FVIII normalnie krąży w osoczu i nie jest obecny w płytkach krwi lub innych krwinkach (22, 23). Nasze laboratorium wykazało wcześniej koszty in vitro FVIII z VWF w megakariocytach a-granulek (22, 23) i śródbłonkowych ciałach Weibel-Palade (21), gdy FVIII jest eksprymowany ektopowo w tych komórkach, a VWF wzmaga tę ekspresję. Klinicznie, u 25-30% pacjentów z hemofilią powstają przeciwciała hamujące odpowiedź na terapię zastępczą FVIII (43, 44), a zatem terapia genowa poprzez konstytutywną syntezę i uwalnianie rekombinowanego FVIII do osocza (tj. Określenie terapii genowej komórkom wątroby lub śródbłonka) może nie być terapeutyczne u tych pacjentów w obecności takich przeciwciał hamujących. Dlatego też chcieliśmy opracować strategię, w której eksprymowany FVIII jest chroniony przed tymi inaktywującymi przeciwciałami, dopóki FVIII nie będzie potrzebny do osiągnięcia miejscowej hemostazy. Takie podejście może obejmować pacjentów z inhibitorami FVIII jako kandydatów do terapii genowej i może być specyficznym środkiem długotrwałego leczenia tych pacjentów nawet w obecności tych inhibitorów. Pokazaliśmy tutaj, że megakariocytową ekspresję F VIII uzyskano w modelu transgenicznym, w którym wytwarzanie FVIII jest napędzane przez promotor płytek krwi IIb. Kiedy transgeniczna ekspresja FVIII płytek krwi 2bF8 została wyhodowana na myszach FVIIInull, płytkowy FVIII utrzymywano u tych myszy, ale FVIII w osoczu pozostawał niewykrywalny. Skuteczność hemostatyczną wykazano przez normalizację przeżycia po przycinaniu ogona u myszy 2bF8rans, w wyraźnym przeciwieństwie do jednolitej śmiertelności obserwowanej u myszy FVIIInull. Oznacza to, że FVIII dostarczony przez płytki 2bF8trans dostarczany jest do miejsc, w których jest dostępny biologicznie, w celu osiągnięcia miejscowej skuteczności hemostatycznej. Nasze podejście terapeutyczne nie dało wykrywalnego FVIII w osoczu
[podobne: wirusowe zapalenie krtani, redukcja tkanki tłuszczowej dieta, uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego ]
[hasła pokrewne: sok z buraka właściwości, redukcja tkanki tłuszczowej dieta, szkoła rodzenia madalińskiego ]