Czynnik VIII, który jest ektopowo ukierunkowany na płytki, jest terapeutyczny w hemofilii A z przeciwciałami hamującymi o wysokim mianie ad 6

Trzy eksperymenty razem wykazały, że ta skuteczność terapeutyczna była ograniczona do ekspresji płytek FVIII: (a) konfokalna immunofluorescencyjna mikroskopia krwi obwodowej przy użyciu przeciwciał przeciwko ludzkiemu FVIII wykazała jedynie wybarwianie płytek; (b) BMT od myszy 2bF8rans do letalnie napromieniowanych biorców FVIIInull wykazał utrzymanie korekcji fenotypowej wyłącznie ekspresją hematopoetyczną; i (c) transfuzja płytek od myszy 2bF8rans do myszy FVIIInull spowodowała korektę fenotypu krwotocznego, nawet gdy tylko frakcja krążących płytek zawierała FVIII. Jaka część płytek optymalnie musiałaby zostać poddana transdukcji i jaki jest optymalny poziom ekspresji FVIII na płytkę krwi, są pytania, na które jeszcze nie udzielono odpowiedzi. Podczas gdy VWF jest wymagany do prawidłowego poziomu FVIII w osoczu (20, 40), chcieliśmy określić jego udział w transgenicznej ekspresji FVIII w płytkach krwi. Przechowywanie FVIII zależy od VWF w komórkach AtT-20 (4) i komórkach śródbłonka (21, 45). FVIII ulega kolokalizacji z VWF, gdy synteza FVIII jest indukowana w megakariocytach (22, 23). W związku z tym należało zbadać 2 zagadnienia. Pierwszym było ustalenie, czy podwojenie syntezy FVIII spowoduje większe magazynowanie FVIII. Myszy homozygotyczne względem transgenu (2bF8tg + / +) miały znacząco podwyższony poziom płytek FVIII, 1,91 razy wyższy niż heterozygotycznych myszy transgenicznych 2bF8 (2bF8tg + / a). Po drugie, chcieliśmy ustalić, czy przechowywanie FVIII było zależne od obecności VWF. Badania przeprowadzone przez Yarovoi i współpracowników (46) przy użyciu testu immunologicznego ELISA FVIII uprzednio wykazały, że antygen FVIII płytki krwi, kierowany przez promotor GPIb, został zredukowany o 27% po wyhodowaniu do VWFa / p. tło w porównaniu z tłem WT. Nasze badania potwierdziły, że obecność VWF (VWF + / + wobec VWFa / p) zwiększyła poziomy płytek FVIII: C zarówno 2bF8tg + /. i myszy 2bF8tg + / +. W nieobecności płytek krwi VWF (myszy VWFnull) utrzymywała się ekspresja i przechowywanie ektopowej płytek FVIII, ale poziomy płytek FVIII wynosiły tylko 52,7% i 57,4% poziomów w 2bF8tg + / r. i myszy 2bF8tg + / +, odpowiednio, w obecności VWF (Figura 3C). Oznacza to, że w płytkach krwi koekspresja z VWF jest ważna dla optymalnej syntezy i / lub przechowywania FVIII. W przeciwieństwie do komórek śródbłonka, w których ciała Weibel-Palade nie występują w nieobecności VWF (45), grudki płytek krwi nadal powstają w nieobecności VWF i stanowią kontynuację, ale nieoptymalne, magazynowanie FVIII. Ponadto, posiadanie 2 chromosomów 18s, każdy z tą samą transgeniczną wstawką, dawało dwukrotnie więcej FVIII zsyntetyzowanego i przechowywanego w transgenicznych płytkach krwi. Nie stwierdziliśmy żadnej różnicy w specyficznej aktywności FVIII wyrażonej w obecności lub nieobecności VWF (danych nie pokazano). Podczas gdy fenotypowa korekta fenotypu krwotocznego poprzez ektopową ekspresję płytek krwi FVIII sama w sobie jest ważną obserwacją, to sukces tego podejścia, nawet w obecności przeciwciał hamujących o wysokim mianie, jest najbardziej przekonujący. Nawet rozwój miana inhibitora 2. 5 BU / ml stanowi trudne i często kosztowne wyzwanie dla opieki klinicznej. Strategia ta może potencjalnie przynieść korzyści terapeutyczne zarówno pacjentom z dziedziczną hemofilią A z inhibitorami, jak i pacjentom bez hemofilii A z nabytymi przeciwciałami hamującymi (3, 47, 48), którzy również mają poważne krwawienie kliniczne zagrażające życiu. Jak pokazano na Figurze 4A, 100% myszy FVIIInull infuzji do tak małego jak 0,02 U / ml rhBDDFVIII w wycinku ogona przetrwało w osoczu. Niskie miana przeciwciał hamujących FVIII (2,5 BU / ml) zmniejszają przeżywalność transfekowanych myszy FVIIInull do 33%, a wyższe miana przeciwciał hamujących (> 25 BU / ml) zmniejszają przeżywalność do 0%. całkowicie znosi korzyści w postaci 0,02 U / ml infuzji FVIII w osoczu. Ponieważ hematopoetyczne komórki macierzyste mogą zarówno samodzielnie odnawiać się, jak i różnicować się we wszystkich liniach krwi, są atrakcyjnym potencjalnym celem terapii genowej. Przeniesienie genu do hematopoetycznych komórek macierzystych może potencjalnie stanowić lekarstwo na wiele dziedzicznych i nabytych chorób układu krwiotwórczego i układu odpornościowego (49). Ekspresja FVIII była kierowana do szpiku kostnego przy użyciu wektorów lentiwirusowych przy użyciu niespecyficznych promotorów tkankowych, chociaż zauważono tworzenie inhibitorów (10. 12). Nawet jeśli wytwarzano przeciwciała hamujące, FVIII wyrażany w płytkach może pozostać biodostępny i osiągnąć skuteczność hemostatyczną. Takie badania są przedmiotem obecnego dochodzenia. Tak więc, komórki szpiku kostnego lub krążące hematopoetyczne komórki macierzyste można zbierać od pacjentów z hemofilią A, transdukowanych lub transfekowanych kasetą ekspresyjną dla FVIII kierowaną przez specyficzny dla płytek promotor i reinfuzji do pacjenta w celu zapewnienia długotrwałej korzyści
[więcej w: zdrowe odżywianie dzieci, sok z buraka właściwości, suplementy na wypadanie włosów ]
[patrz też: mleko z biedronki wycofane, suplementy na wypadanie włosów, zst kolbuszowa ]