Czynnik VIII, który jest ektopowo ukierunkowany na płytki, jest terapeutyczny w hemofilii A z przeciwciałami hamującymi o wysokim mianie ad 9

Myszy FVIIInull immunizowano 200 ul rhBDDFVIII przy 600 U / kg w obecności adiuwanta (Corixa) poprzez wstrzyknięcie ip w celu indukcji przeciwciał przeciw ludzkiemu czynnikowi FVIII. W celu określenia miana inhibitorów przeprowadzono zmodyfikowany test Bethesda. Sekwencyjne rozcieńczanie immunizowanego mysiego osocza inkubowano z równą objętością U / ml rhBDDFVIII w 37 ° C przez 2 godziny, a resztkowy FVIII: C następnie analizowano za pomocą testu chromogennego. BU zdefiniowano przez rozcieńczenie osocza krwi aż do zneutralizowania 50% początkowego FVIII (39). W modelu ostrym mysie osocze z immunizowanych myszy FVIIInull zawierających przeciwciała hamujące FVIII podawano w infuzji do heterozygotycznych myszy 2bF8rans przez wstrzyknięcie pozorne. Jedną godzinę po infuzji pobrano krew i badano osocze pod kątem inhibitorów. Test przeżycia ogona ogonowego przeprowadzono w celu określenia, czy FVIII pochodzący z płytek krwi może być nadal skuteczny terapeutycznie w obecności inhibitorów. Jako kontrolę myszy FVIIInull uprzednio wstrzyknięte z osoczem inhibitora mysiego lub osoczem kontrolnym podawano w infuzji 0,02 U / ml rhBDDFVIII i wykonywano zacisk ogonowy. W modelu przewlekłym komórki śledziony od immunizowanych myszy FVIIInull przeszczepiano myszom 2bF8trans w podłożu subletycznie napromienionym. Śledziony od immunizowanych myszy FVIIInull zmielono, a czerwone krwinki poddano lizie za pomocą buforu Red Cell Lysing (Sigma-Aldrich). Komórki przemyto i ponownie zawieszono w PBS (Invitrogen) w ilości 1×108 komórek / ml do przeszczepu. Osiem do 10-tygodniowych myszy 2bF8trans kondycjonowano do transplantacji komórkowej z subletalną dawką napromieniowania całego ciała 400 cGy. Dwadzieścia cztery godziny po naświetlaniu, komórka zawierająca 2. 3 x 107 komórek z immunizowanej śledziony FVIIInull w objętości 200. 300. L / mysz była infuzowana przez wstrzyknięcie pozorne. Jako kontrolę, tę samą dawkę komórek przeniesiono do uwodnionych myszy WT, które zawierały normalny mysi FVIII. Dwa tygodnie po transplantacji pobrano krew, a liczbę komórek policzono za pomocą licznika krwi zwierzęcia. Osocze badano za pomocą analizy inhibitorów i przeprowadzono test przeżycia ogona w celu określenia korekcji fenotypowej. Opracowano drugi model przewlekły, który obejmował immunizację heterozygotycznych myszy 2bF8trans rhBDDFVIII przy 600 U / kg podanej z adiuwantem w postaci iniekcji ip. Dwa tygodnie po immunizacji pobrano krew i określono liczbę komórek za pomocą licznika krwi zwierzęcia. Osocze zastosowano do analizy inhibitorów, a płytki krwi do oznaczenia lizatu płytek FVIII: C. Test przeżycia ogona ogonowego przeprowadzono w celu określenia korekcji fenotypowej. Statystyka. Wszystkie wyniki FVIII: C przedstawiono jako średnie. SD, a istotność różnic oceniano za pomocą dwustronnego testu Studenta. Wartość P <0,05 została uznana za statystycznie istotną. Podziękowania Potwierdzamy pomoc techniczną S. Kalloway, M. Kipp, J.Foeckler i D. Reimesch (Transgenic Core Facility) w generowaniu transgenicznych zwierząt. Dziękujemy H. Kazazianowi (University of Pennsylvania School of Medicine, Filadelfia, Pensylwania, USA) za myszy FVIIInull. Myszy VWFnull zostały opracowane przez D. Wagnera z Harvard Medical School i zakupione od Jackson Laboratory. Praca ta została wsparta przez NIH udziela HL 44612 i HL 33721 (do RR Montgomery), HL 68138 (do DA Wilcox) i HL 44612-14 (do H. Weiler); przez American Heart Association udziela 0320043Z i 0520035Z (do Q. Shi); i przez Children s Hospital Foundation (do Q. Shi). Przypisy Stosowano nietypowe skróty: 2bF8, ludzki promotor hllDDFVIII z promotorem IIb; 2bF8trans, mysz FVIIInull z ekspresją transgenu 2bF8; 2bF8tg + / y, heterozygotyczny 2bF8trans; 2bF8tg + / +, homozygotyczny 2bF8trans; BMT, przeszczep szpiku kostnego; BU, jednostki Bethesdy; CHAPS, 3 - [(3-Chaloamidopropylo) dimetyloamonio] -1-propanosulfonian; FVIII, czynnik VIII; Aktywność FVIII: C, FVIII; FVIIInull, z niedoborem FVIII (mysz); GP, glikoproteina; hBDDFVIII, ludzki FVIII usunięty z domeny B; rhBDDFVIII, rekombinowany hBDDFVIII; VWFnull, brak VWF (mysz). Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.116: 1974. 1982 (2006). doi: 10.1172 / JCI28416. [podobne: szkoła rodzenia madalińskiego, zss kolbuszowa dolna, przychodnia ożarów mazowiecki ] [podobne: wirusowe zapalenie krtani, zdrowe odżywianie dzieci, syrop tymiankowy złożony ]