Czynnik VIII, który jest ektopowo ukierunkowany na płytki, jest terapeutyczny w hemofilii A z przeciwciałami hamującymi o wysokim mianie czesc 4

Ponadto sekwencyjny BMT do drugiej generacji biorców utrzymywał podobne poziomy FVIII: C w płytkach krwi, jak określono w teście lizatu płytek FVIII: C, wykazując w ten sposób długotrwałą rekonstytucję. Wszyscy odbiorcy (z 4 oddzielnych eksperymentów BMT) przeżyli obcinanie ogonów (rysunek 3D). W grupie kontrolnej żaden z 4 biorców, którzy otrzymali jednojądrzaste komórki szpiku kostnego od myszy FVIIInull, nie posiadał FVIII: C w swoim lizacie płytek krwi i żaden nie miał korekcji fenotypowej. Aby potwierdzić, że ten korzystny efekt pochodzi z płytek krwi, przetworzyliśmy różne proporcje przemytych heterozygotycznych płytek 2bF8rans do myszy FVIIInull, a następnie wykonano test przeżycia ogona ogonowego. Wszystkie 7 myszy FVIIInull, którym podano 2bF8tg + /. Płytki krwi w celu osiągnięcia końcowego poziomu 30% wszystkich płytek krwi przeżyły przycinanie ogona, podczas gdy 5 z 6 myszy FVIIInull, którym podawano taką samą liczbę płytek krwi od myszy WT, nie przeżyło obcinania ogona. Infuzja płytek FVIIInull nie miała wpływu na przeżycie (Figura 3E). Gdy niższe dawki (10. 20%) 2bF8tg + /. płytki krwi poddano infuzji, wykazano pewną korzyść. Spośród 6 myszy FVIIInull infuzji 2bF8tg + /. płytki krwi do osiągnięcia końcowego poziomu 20%, pięć przeżyło przycinanie ogona i 3 z 6 myszy infuzji do 10% wszystkich płytek krwi przeżyło. Dane te wykazują, że FVIII płytek jest wystarczający do skorygowania fenotypu hemofilowego A u myszy. W poprzednich badaniach przeprowadzonych w naszym laboratorium ponad 50% skuteczności transdukcji można wykazać przy użyciu lentiwirusowej terapii genowej w przypadku niedoborów GP w zakresie płytek krwi (GPIIIa, pozycja 37 lub GPIbp, odnośnik 38). Tak więc osiągnięcie ekspresji transgenu w 30% płytek byłoby możliwe dzięki terapii genowej autologicznych hematopoetycznych komórek macierzystych. Korekta fenotypu hemofilowego u myszy FVIIInull występuje nawet w obecności inhibitorów FVIII o wysokim mianie. Aby zbadać, czy FVIII pochodzący z płytek krwi może utrzymać skuteczność terapeutyczną w obecności inhibitorów FVIII, zastosowaliśmy 3 strategie: (a) ostry model infuzyjny osocza od wysoce immunizowanych myszy FVIIInull; (b) przewlekły model wykorzystujący przeszczep komórek śledziony od immunizowanych myszy FVIIInull do myszy transgenicznych, napromieniowanych subtelnie 2bF8; i (c) czynną immunizację myszy 2bF8rans z rhBDDFVIII z adiuwantem. Miano inhibitora określono za pomocą zmodyfikowanego testu Bethesda (39) i wyrażono w jednostkach Bethesda (BU). Miana inhibitorów osocza po badaniach infuzyjnych potwierdzono w teście Bethesda. Myszy FVIIInull, którym podawano rhBDDFVIII do poziomu 0,02 U / ml w osoczu, normalnie przeżyły po wycięciu ogona. Spośród 6 myszy FVIIInull infuzowanych do miana Bethesda 2,5 BU / ml z osoczem hamującym od immunizowanych myszy FVIIInull, a następnie otrzymujących 0,02 U / ml rhBDDFVIII, tylko 2 przeżyło przycinanie ogona. U myszy podawanych w infuzji do poziomu 25 lub 250 BU / ml, 0 z 12 myszy, którym podawano infuzję 0,02 U / ml, przeżyło przycinanie ogona (Figura 4A). Figura 4 Pochodzący od płytek FVIII może działać w obecności przeciwciał hamujących FVIII. (A) Odpowiedź na dawkę infuzji rhBDDFVIII u myszy FVIIInull. Gdy rhBDDFVIII wprowadzono do myszy FVIIInull i przeprowadzono zacisk ogonowy, wszystkie myszy FVIIInull przeżyły przycinanie ogona po infuzji do końcowego poziomu 0,02 U / ml rhBDDFVIII. Gdy rhBDDFVIII wlewano w tym samym stężeniu (0,02 U / ml) myszom FVIIInull uprzednio wstrzykniętym plazmidem z inhibitorem myszy, żadne myszy FVIIInull z 25 lub 250 BU / ml nie przeżyły przycięcia ogona. (B) Odpowiedź na dawkę wlewu inhibitora FVIII u myszy 2bF8trans. Różne dawki osocza inhibitora od immunizowanych myszy FVIIInull infuzowano do 2bF8tg + / y. myszy. Wszystkie myszy przeżyły obcinanie ogona po wlewie z mniejszą niż 25 bu / ml osoczem hamującym, a 7 z 8 przeżyło z mianem 250 BU / ml. (C) Test przeżycia ogona ogonowego na biorcach przeszczepionej komórki śledziony. Podsublicznie napromieniowane 2bF8tg + /. lub myszy WT otrzymały komórki śledziony od immunizowanych myszy FVIIInull. Dwa tygodnie po przeszczepie, osocze testowano za pomocą analizy inhibitorów i przeprowadzono test przeżycia ogona ogonowego. Transgeniczne myszy 2bF8rans wykazywały zwiększony czas przeżycia ogona, nawet w obecności miana powyżej 5000 BU / ml. (D) Test przeżycia ogona ogonowego immunizowanych myszy 2bF8trans. Heterozygous 2bF8tg + /. myszy immunizowano rhBDDFVIII (z adiuwantem) przez jednorazowe wstrzyknięcie ip. Dwa tygodnie po immunizacji zastosowano plazmę do ilościowego oznaczania inhibitora i przeprowadzono test przeżycia ogona ogonowego. Wszystkie immunizowane myszy 2bF8trans przeżyły przycinanie ogona z miana 10. 50 BU / ml
[przypisy: instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi, zst kolbuszowa, szkoła rodzenia madalińskiego ]
[patrz też: stężenie alkoholu we krwi kalkulator, kalendarz triathlon 2015, krem pod oczy z peptydami ]