Czynnik VIII, który jest ektopowo ukierunkowany na płytki, jest terapeutyczny w hemofilii A z przeciwciałami hamującymi o wysokim mianie

Hamująca odpowiedź immunologiczna na podawany egzogennie czynnik VIII (FVIII) jest poważnym powikłaniem w leczeniu hemofilii A. Wytwarzanie takich inhibitorów może przerwać terapię genową w przypadku hemofilii A. Zbadamy, co uważamy za nowe podejście do przezwyciężenia tego problemu. niedociągnięcie. Ludzki FVIII z usuniętą domeną B (hBDDFVIII) ulegał ekspresji pod kontrolą specyficznego względem płytek promotora. Llb w płytkach krwi myszy hemofilnych (FVIIInull) w celu utworzenia myszy 2bF8rans. Produkt transgenu FVIII przechowywano w płytkach krwi i uwalniano w miejscu aktywacji płytek. Pomimo braku FVIII w osoczu myszy 2bF8trans, poprawiono fenotyp krwawienia myszy FVIIInull. Co ważniejsze, fenotyp krwawienia korygowano w obecności wysokich mian przeciwciał hamujących wprowadzanych do myszy przez infuzję lub transfer komórek śledziony z immunizowanych myszy rekombinowanych hBDDFVIII. Nasze wyniki wskazują, że to podejście do ukierunkowanej ekspresji FVIII w płytkach krwi może potencjalnie korygować hemofilię A, nawet w obecności hamujących odpowiedzi immunologicznych na infuzję FVIII. Wprowadzenie Choroby monogenowe, charakteryzujące się utratą swoistego białka osocza, są obecnie leczone przez powtarzalną terapię zastępczą i są kandydatami do wyboru nadającymi się do terapii genowej. Hemofilia A, ciężkie wrodzone zaburzenie krzepnięcia wywołane przez utratę czynnika krzepnięcia VIII (FVIII) (1), jest prototypem takich monogennych chorób. Obecnie hemofilia A jest leczona infuzją rekombinowanego lub pochodzącego z osocza FVIII (2). Jednak u 25-30% pacjentów pojawiają się przeciwciała (inhibitory FVIII), które selektywnie dezaktywują aktywność krzepnięcia FVIII i negują jego skuteczność terapeutyczną (3). Hemofilia A jest uważana za silnego kandydata do terapii genowej, ponieważ okno terapeutyczne jest szerokie i nawet minimalny poziom w osoczu FVIII w osoczu jest klinicznie korzystny. Rozwój hamujących przeciwciał przeciwko produktowi transgenu FVIII w osoczu pozostaje istotną barierą dla niektórych kandydatów na pacjentów. Wiele grup opracowało różne strategie kierowania syntezą FVIII (4. 15), chociaż niedociągnięcia w dostarczaniu genów i ich ekspresji oraz powstawaniu inhibitorów pozostają problemami klinicznymi (7, 16. 18). Podejście, które badaliśmy, które uważamy za nowatorskie, opiera się na hipotezie, że celowanie w produkcję FVIII do komórek wydzielających, które działają w bezpośrednim sąsiedztwie miejsc, gdzie potrzebny jest czynnik VIII, może pokonać obecność przeciwciał hamujących. Co więcej, poprzez sekwestrację czynnika VIII, można zapobiec wytwarzaniu przeciwciał u osób naiwnych lub co najmniej zmniejszyć ich znaczenie. Wykonalność takiego podejścia potwierdza fakt, że w osoczu VWF służy jako obligatoryjne białko nośnikowe dla FVIII i chroni je przed degradacją proteazową i szybkim usuwaniem (1, 19, 20). Wcześniej wykazaliśmy, że koekspresja FVIII w komórce, która przechowuje VWF, powoduje obniżenie kosztów i uwolnienie FVIII (4, 21). Dokładniej, ukierunkowanie ekspresji FVIII na megakariocyty powoduje przechowywanie FVIII z VWF w granulkach (3 płytek krwi (22, 23). Megakariotyczny promotor specyficzny dla linii będzie kierował ekspresję FVIII tylko do linii komórek krwi, gdzie VWF jest normalnie endogennie syntetyzowany i przechowywany (20, 24). Poncz i współpracownicy donieśli, że eksprymują FVIII w płytkach krwi pod kontrolą glikoproteiny Ib. Promotor (GPIb.) U myszy z niedoborem FVIII (FVIIInull) może złagodzić krwawienie w modelu myszy FVIIInull (9). Oprócz płytek krwi, GPIb. ekspresja została podobno zsyntetyzowana w śródbłonku (25-27) i komórkach nowotworowych piersi (28). W związku z tym wybraliśmy specyficzny dla płytki promotor genu GPIIb (promotor | llb), który, jak wykazano, kieruje transkrypcję genów swoistych dla megakariocytów (22, 29. 37). W bieżącym badaniu użyliśmy promotora | llb do kierowania ekspresją FVIII i określiliśmy (a), że transfekowany FVIII z ekspresją płytek krwi skutecznie chronił myszy FVIIInull przed krwawieniem, (b) że ta ochrona była przenoszona na biorców FVIIInull przez transgeniczną transfuzję płytek krwi. i (c), że ta skuteczność terapeutyczna była utrzymywana nawet w obecności przeciwciał przeciw FVIII o wysokim mianie hamującym. Takie podejście może być obiecujące dla leczenia hemofilii, jak również dla innych stanów, w których brakujące białko może być skierowane bezpośrednio do miejsca pożądanej aktywności. Ponadto obecność istniejących przeciwciał hamujących może nie być przeciwwskazaniem do takiego podejścia. Wyniki Transgeniczna ekspresja FVIII w płytkach krwi
[podobne: niepokój manipulacyjny, syrop tymiankowy złożony, kolbuszowa dolna ]
[więcej w: instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi, niepokój manipulacyjny, wirusowe zapalenie krtani ]