Hamowanie nefropatii cukrzycowej przez peptyd wabika odpowiadający uchwytowi region dla nieprololitycznej aktywacji proreniny ad 9

Natychmiast po dekapitowaniu pobrano 3 ml próbkę krwi do probówki zawierającej 30 ul EDTA (500 mM), 15 ul enalaprylu (1 mM) i 30 ul o-fenantroliny (24,8 mg / ml) i pepstatynę (0,2 mM), a próbki osocza uzyskano przez odwirowanie. Aktywność reniny w osoczu określono za pomocą zestawu kulek powleczonych RIA (Dinabott Radioisotope Institute). Poziom proreniny w plazmie obliczono przez odjęcie aktywności reninowej osocza od całkowitej aktywności osocza (nieaktywny plus aktywny), jak opisano wcześniej (31). W celu pomiaru całkowitej zawartości reniny w nerkach zważono część usuniętej nerki, umieszczono w 5 ml buforu zawierającego 2,6 mM EDTA, 1,6 mM dimerkaprolu, 3,4 mM siarczanu 8-hydroksychinoliny, 0,2 mM PMSF i 5 mM octanu amonu, homogenizowane za pomocą schłodzonego homogenizatora szklanego, a następnie odwirowywane. Aktywność reniny w supernatancie określono w sposób opisany uprzednio (32). W celu oznaczenia zawartości nerek Ang I i II zważono połowę usuniętej nerki, umieszczono w schłodzonym w lodzie metanolu (10% wag./obj.), Homogenizowano w schłodzonym homogenizatorze szklanym, a następnie odwirowano. Supernatant następnie wysuszono i odtworzono w 4 ml 50 mM buforu fosforanu sodu zawierającego 1% albuminy. Osocze i rekonstytuowane próbki z nerek ekstrahowano kolumną Bond-Elut (Analytichem Co.), a eluenty odparowano do sucha i odtworzono w rozcieńczalniku do analizy peptydu Ang. Zawartość Ang I i II oznaczono ilościowo za pomocą RIA przy użyciu króliczej surowicy odpornościowej przeciwko Ang I i króliczej surowicy odpornościowej przeciwko Ang II (Arnel Inc.), jak podano wcześniej (33). Ilościowa analiza RT-PCR w czasie rzeczywistym. Wyekstrahowaliśmy całkowity RNA z części nerki usuniętej z każdego zwierzęcia, stosując zestaw RNeasy Mini (QIAGEN KK) i wykonano ilościowy RT-PCR w czasie rzeczywistym, stosując zestaw TaqMan One-Step RT-PCR Master Mix Reagents z ABI System detekcji PRism 7700 HT (Applied Biosystems Inc.) oraz sondy i primery dla genów szczurzych kodujących następujące: renina (do przodu, 5 (3-GCTACATGGAGATATGGGACTGAA-3 (3, odwrotna, 5 (3-ACCATCTTGGCTGAGGAAAC-3 (3, sonda, 5 (y – FAM-CCATCCACTATGGATCAGGGAAGGTCAA-TAMRA-3.); ACE (do przodu, 5a-CTGCCTCCCAACGAGTTAGAA-3 (3, odwrotna, 5a-CGGGACGTGGCCATTATATT-3a, sonda, 5a-FAM-AAATGGCACTTGTCTGTCACTGGAGCC-TAMRA-3a); angiotensynogen (do przodu, 5 (3 -AGCACGGACAGCACCCTATT-3 (3, odwrotna, 5 (3 -AGAACTCATGGAGCCCAGTCA-3a, sonda, 5a-FAM-TCAACACCTACGTTCACTTCCAAGGGAAGA-TAMRA-3a); katepsyna B (do przodu, 5a-AAATCAGGCGTATACAAGCATGA-3 (3 do tyłu, 5 (3 -GCCCAGAATGCGGATGG-3a, sonda, 5a-FAM-CCGGTGATGTGATGGGAGGCCA-TAMRA-3a); i GAPDH (do przodu, 5a-TGACAACTCCCTCAAGATTGTCA-3a, odwrotna, 5a-GGCATGGACTGTGGTCATGA-3a, sonda, 5a-FAM-TGCATCCTGCACCACCAACTGCTTAG-TAMRA-3a); jak opisano wcześniej (34, 35). Analizy statystyczne. Porównania statystyczne w obrębie grupy dokonywano za pomocą jednokierunkowej ANOVA dla powtarzanych pomiarów, a następnie testu post hoc Newmana-Keulsa. Różnice między dwiema grupami oceniano za pomocą dwuczynnikowej ANOVA dla powtarzanych pomiarów w połączeniu z testem post-hoc Newmana-Keulsa. Wartość AP mniejsza niż 0,05 została uznana za znaczącą. Dane są zgłaszane jako średnie. SEM. PodziękowaniaTa praca została częściowo wsparta grantami 14571073, 1503340 i 16613002 z Ministerstwa Edukacji, Nauki i Kultury Japonii; dotacja od Fundacji Nauki Takeda (do A. Ichihary); Grant badawczy NIH HL-58205; oraz granty badawcze w dziedzinie zdrowia i pracy, badania nad środkami dla chorób nieuleczalnych, z Ministerstwa Zdrowia, Pracy i Opieki Społecznej Japonii. Dziękujemy Rice Wakita za poświęcenie jej uwagi wielu szczegółom związanym z przygotowaniem tego artykułu. Przypisy Niestandardowe skróty: ACE, enzym konwertujący Ang; Szczur C, szczur bez kontroli cukrzycowej z minipompą solną; Szczur C + HRP, szczur bez kontroli cukrzycy z minipompą zawierającą HRP; Szczur DM + HRP, szczur z cukrzycą z minipompą HRP; DM szczur, szczur z cukrzycą z minipompą zawierającą sól fizjologiczną; HRP, manipuluj peptydem regionu; RAS, system renin-Ang. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów.
[podobne: narodowy fundusz zdrowia w łodzi, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi, zst kolbuszowa ]
[hasła pokrewne: wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego, zss kolbuszowa dolna ]