Hamowanie nefropatii cukrzycowej przez peptyd wabika odpowiadający uchwytowi region dla nieprololitycznej aktywacji proreniny ad

Rekombinowaną szczurzą proreninę analizowano metodą immunoblottingu przy użyciu 3 nM oczyszczonego Ab do HRP pod nieobecność (a) ścieżki 1) lub obecności (3M regionalnych peptydów prosegmentu proreninowego, SFGR (linia 2), MTRISAE (linia 3), lub RILLKKMPSV (ścieżka 4). Obraz pokazuje, że HRP wiąże się z przeciwciałem anty-HRP z wysokim powinowactwem i hamuje wiązanie rekombinowanej proreniny z anty-HRP-Ab. Podobne wyniki uzyskano również przy 10 i 100 nM RILLKKMPSV. (B) Rekombinowaną szczurzą proreninę (PR) (ścieżki i 3) i reninę (R) (ścieżki 2 i 4) analizowano przez immunoblotting z użyciem anty-szczurzego reniny Ab w nieobecności (ścieżki i 2) lub obecności 1. M HRP, RILLKKMPSV (ścieżki 3 i 4). Obraz pokazuje, że HRP specyficznie wiąże się z anty-HRP-Ab, ale nie z anty-reniną Ab i nie hamuje wiązania proreninu z anty-reniną Ab. Podczas wstępnych eksperymentów in vitro uzyskano ekspresję białka receptora proreniny / reniny (numer dostępu AB188298 w japońskim banku danych Databank) w komórkach COS-7 i wykazano wiązanie i aktywację rekombinowanej szczurzej proreniny o 20%. 2,5% poziomu aktywowanego trypsyną (350 ng Ang I / ml / godz.). Ta aktywacja została praktycznie zniesiona przez szczurzy HRP (10P. 19P) stosowany jako wabik przy 1. M, ale nie przez inny heptapeptyd prosegmentu (30P. 36P) poza regionem uchwytu, wskazując specyficzne hamujące działanie HRP przeciwko aktywacji proreniny. Stwierdziliśmy również, że prorenina aktywowana przez receptory proreniny / reniny szczura wyrażane na komórkach COS-7 może być związana z anty-szczurzym HRP na komórkach, wizualizowana za pomocą intensyfikacji drugiego Ab skoniugowanego z peroksydazą. Wynik ten wskazywał, że prorenina aktywowana przez białko receptorowe nadal miała prosegmentację obejmującą region uchwytu i że aktywacja proreniny przez białko receptorowe prawdopodobnie nie była spowodowana mechanizmem proteolitycznym, ale była spowodowana zmianą konformacyjną. Analogicznie do białka wiążącego proreninę / reninę, poliklonalne Abs ze szczurzym HRP aktywowały również proreninę szczura o 20%. 1,0% maksymalnej aktywacji możliwej do uzyskania przez trypsynę, a aktywacja została praktycznie zniesiona przez 1. M HRP stosowanego jako wabik. Wyniki te wskazują, że specyficzne wiązanie proreniny z białkiem receptorowym lub z Ab do HRP powoduje znaczącą aktywację proreniny. Obserwacje te dostarczają dowodów in vitro, że HRP hamuje aktywację przez konkurowanie wiązania receptora prorenyny lub HRP Abs z proreniną. Zmiany metaboliczne i wydalanie białka z moczem. Wyznaczono zmiany metaboliczne i wydalanie białka z moczu u szczurów bez kontroli cukrzycy z minipompami solnymi (szczury C), szczurami bez kontroli cukrzycy z minipompami zawierającymi HRP (szczury C + HRP), szczurami z cukrzycą z minipompami zawierającymi sól fizjologiczną (szczury DM) i szczurami z cukrzycą z minipompami HRP (szczury DM + HRP) podczas 24-tygodniowego okresu leczenia (Figura 3). Waga ciała szczurów DM wynosiła średnio 231. 15 g w 28 tygodniu życia i było znacznie mniejsze niż szczury C (590. 10 g). Podstawowy BP szczurów C i DM wynosił średnio 123. 2 i 122. 2 mmHg, odpowiednio, a BP było podobne u szczurów C i DM podczas 24-tygodniowego okresu leczenia. Poziom glukozy we krwi szczurów DM wynosił średnio 509. 34 mg / dl w 8 tygodniu życia (4 tygodnie cukrzycy) i był znacząco wyższy niż u szczurów C (132. 14 mg / dl). Wyższe poziomy glukozy we krwi szczurów DM w porównaniu ze szczurami C utrzymywano podczas 24-tygodniowego okresu leczenia. Ciągły wlew HRP przez podskórne minipompy nie wpływał na masę ciała, BP ani poziomy glukozy we krwi u szczurów kontrolnych lub z cukrzycą podczas 24-tygodniowego okresu leczenia, chociaż masa ciała u szczurów z cukrzycą wzrosła w 24 i 28 tygodniu życia. U szczurów DM wydalanie białka w moczu znacznie wzrosło z 20,0. 3.1 w 4 tygodniu życia (0 tygodni cukrzycy) do 118,8. 11,9 mg / dobę w wieku 28 tygodni (24 tygodnie cukrzycy), a HRP praktycznie znormalizowało zwiększone wydalanie białka z moczem u szczurów z cukrzycą do poziomów podobnych do szczurów kontrolnych. Wydalanie białka z moczem w wieku 28 tygodni (24 tygodnie cukrzycy) u szczurów DM + HRP wynosiło średnio 33,0. 4,1 mg / dzień i był podobny do tego u szczurów C i C + HRP. Figura 3 Zmiany metaboliczne i wydalanie białka z moczu u szczurów C (kółka otwarte, n = 18), szczury C + HRP (zamknięte kółka, n = 18), szczury DM (otwarte kwadraty, n = 18) i szczury DM + HRP (zamknięte kwadraty, n = 18). (A) Masa ciała. Wykres pokazuje tłumienie przyrostu masy ciała u szczurów z cukrzycą. Z wyjątkiem wzrostu w wieku 24 i 28 tygodni u szczurów z cukrzycą, HRP nie wpływał na masę ciała podczas 24-tygodniowego okresu leczenia. * P <0,05 versus szczury C lub C + HRP; P <0,05 dla DM + HRP względem szczurów DM [więcej w: niepokój manipulacyjny, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi, redukcja tkanki tłuszczowej dieta ] [więcej w: uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego, zss kolbuszowa dolna, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi ]