Homeostaza ciśnienia krwi jest utrzymywana przez P311 TGF- oś ad 5

Zgodnie z faktem, że aktywny RhoA promuje skurcz mięśni naczyniowych przez hamowanie fosfatazy łańcucha lekkiego miozyny (MLCP, za pośrednictwem fosforylacji regulowanej przez ROCK jego podjednostki regulacyjnej, MYPT1) (28), fosforylowana frakcja MYPT1 była zmniejszona w P311 (3). myszy. Wreszcie, VSMCs izolowane od P311. /. aorty były mniej skuteczne pod względem skurczu żeli kolagenowych niż te pochodzące ze zwierząt WT, podczas gdy skurcz poprawił się po transfekcji P311, potwierdzając, że nieprawidłowość funkcjonalna spoczęła na samym mięśniu naczyniowym i że P311 bezpośrednio regulowała kurczliwość VSMC. My i inni donosiliśmy, że P311 moduluje TGF-. ekspresja po transfekcji do fibroblastów NIH-3T3 (1, 5, 6). Tak więc, następnie określiliśmy ekspresję TGF-P 1, TGF-a 2 i TGF-a 3 w P311 p / P. i aorty WT. Co ciekawe, podczas gdy poziomy mRNA Tgfb1, Tgfb2 i Tgfb3 ulegały zwiększeniu w tkankach aorty izolowanych z P311 P / P. myszy, całkowite i aktywne poziomy białka w 3 izoformach były znacznie zmniejszone w VSMC, jak również w próbkach osocza tych myszy. Zredukowane TGF-. aktywność występowała na poziomie ekspresji pro. TGF-pi, pro. TGF-a2 i pro. TGF-a3, z towarzyszącymi spadkami w odpowiadających poziomach LAP, które niekowalencyjnie wiążą się z dojrzałym TGF-y. Zgodnie z tymi ustaleniami, dalsze cele TGF-. sygnalizowanie (tj. fosforylowane rdzeniatory transkrypcyjne Smad2 i Smad3) również uległy zmniejszeniu. Ponadto P311. /. myszy niosące aktywny TGF-. konstrukt reporterowy, CAGA12 / GFP, potwierdził niższą aktywność niż ich odpowiedniki WT w całych aortach i kulturach VSMC. Wyniki te różniły się od naszych poprzednich obserwacji komórkami NIH-3T3, w których transfekcja P311 zniosła ekspresję TGF-pi i TGF-a2 bez wpływu na ekspresję TGF-a3 (6). Obserwacja, że komórki NIH-3T3 i VSMC reagowały inaczej na P311 sugeruje, że jego działanie jest specyficzne dla komórki, co może dodatkowo potwierdzać wcześniejsza obserwacja, że nadekspresja P311 stymuluje transkrypcję TGF-P1 w kulturach fibroblastów skóry (5). Nasze odkrycia in vivo były jednak niespójne z rolą P311 w TGF-a. transkrypcja przez VSMC. Co godne uwagi, samo podawanie TGF-a1-3 przywróciło ciśnienie krwi, kurczliwość i aktywność RhoA w P311. /. myszy. W podobny sposób przywrócono także kurczliwość w P311. /. VSMC po obróbce koktajlem TGF-a1-3. Po podaniu pojedynczo, TGF-P1 i TGF-a3 wywierały efekty porównywalne z obserwowanymi przy TGF-a1-3 (chociaż mniej wyraźny), podczas gdy TGF-a2 nie wywierał żadnego działania. Podczas gdy wcześniejsze badania wykazały rolę TGF-P1 w regulacji ciśnienia krwi (29. 31), stanowi to pierwszy przypadek, w którym oceniono potencjalny wpływ TGF-a2 i TGF-. 3 na poziomy ciśnienia krwi i pierwszy wykazanie, że TGF-A3 je zwiększyło. Aby ustalić, czy P311 może bezpośrednio regulować TGF-. aktywność i napięcie naczyniowe in vivo, wygenerowaliśmy transgeniczne myszy z nadekspresją P311. Jak przewidywano, myszy transgeniczne P311 wykazywały wzrost we wszystkich 3 pro-TGF-a. poziomy w tkankach aorty, ze zwiększonym TGF-. czynność . jak wskazano myszami reporterowymi CAGA12 / GFP. skutkując zwiększonymi poziomami w osoczu całkowitego i aktywnego TGF-a1, TGF-a2 i TGF-a3, jak odnotowano dla ludzkiego nadciśnienia i TGF-a1 (32. 34). Ponadto, transgeniczne myszy P311 rozwinęły nadciśnienie, co wskazuje nie tylko na to, że P311 jest potrzebny do zapobiegania niedociśnieniem, ale że jego wzrost jest wystarczający do spowodowania wysokiego ciśnienia krwi. Wzrost TGF-. mRNA w P311. /. myszy, w połączeniu ze spadkiem TGF-a obserwowane izoformy sugerują, że P311 reguluje TGF-a na poziomie potranskrypcyjnym, działającym w tłumaczeniu, degradacji lub obu. Oznaczanie immunoprecypitacji ubikwityny wykluczyło różnice w degradacji. Jednakże, gdy konstruowano wektory ekspresyjne lucyferazy, które zawierały 5. i 3 -UTR TGF-a1, TGF-a2 lub TGF-a3, białko lucyferazy było wyrażane na niższych poziomach w P311 p / P. w porównaniu z komórkami WT, co wskazuje, że P311 reguluje translację TGF-y. Dalsze analizy wykazały, że stymulujący wpływ P311 na ekspresję lucyferazy był ograniczony do 5a -UTR odpowiedniego TGF-a. izoformy. Ponadto, immunoprecypitacja RNA ujawniła wzbogacenie TGF-a. 5 mRNA y -UTR w VSMC izolowanych z transfekowanego P311 P311. /. myszy w porównaniu z kontrolami transfekowanymi pozornie, zgodnymi z rolą P311 w translacji TGF-y. Ponieważ P311 nie ma motywów wiążących RNA, interakcja P311-mRNA prawdopodobnie będzie pośrednia przez jedno lub więcej jeszcze niescharakteryzowanych białek. Zatem P311 kontroluje TGF-a poziomy i / lub aktywność, działając jako pierwszy znany regulator swojej aktywności translacyjnej. Ponieważ P311 nie było wcześniej związane z homeostazą naczyń krwionośnych, w końcu rozważaliśmy możliwość, że białko odgrywa rolę w nadciśnieniu tętniczym u ludzi
[podobne: zdrowe odżywianie dzieci, kolbuszowa dolna, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi ]
[hasła pokrewne: szkoła rodzenia madalińskiego, mleko z biedronki wycofane, suplementy na wypadanie włosów ]