Homeostaza ciśnienia krwi jest utrzymywana przez P311 TGF- oś ad 9

Kulki agarozowe przemyto 3 razy w buforze do lizy i ponownie zawieszono w TRIzol w celu izolacji RNA. RNA z koimmunoprecypitacją wykrywano metodą PCR w czasie rzeczywistym z użyciem starterów specyficznych dla Tgfb1 (sensowny, 5a-GCTCCCCTATTTAAGAACACCC-3a, antysensowny, 5a-TTGAGGTTGAGGGAGAAAGC-3a), Tgfb2 (sensowny, 5a-AGTGGGAGAGAAAGAGAGAAGG-3 (3, antysensowny, 5 (3-GCGACCCTAAAATAGACCTCTG-3a), Tgfb3 (sensowny, 5a-AAGAGAAGCAAGGGACAGAAG-3 (3, antysensowny, 5a-GCTGGGATGAGGGATTATGTAC-3a), Inhba (sensowny, 5a-TGACAAAACAGAAGGGACCC-3 (3, antysensowny, 5a-CAGCAAAAGTCGTGTGGTTG); -3 (3), B9d2 (sensowny, 5a-ACAGTGCACCTTGGTATCG-3 (3, antysensowny, 5 (3-ACAGTCTCCAGAGTCCACG-3a), Actb (sensowny, 5 (3-CTGTATTCCCCTCCATCGTG-3 (3, antysensowny, 5 (3-GCCTCGTCACCCACATAG-3.) i Tuba1a (sensowny, 5a-GCGAAGCAGCAACCATG-3 (3, antysensowny, 5a-TCTTGTCACTTGGCATCTGG-3a). Badania nad kurczeniem się żelu. Badania nad kurczliwością żelu przeprowadzono przy użyciu 5 ml roztworu kolagenu I szczura (2 mg / ml w 0,1% kwasu octowego) zmieszanego z ml 10 x DMEM i ml 0,1 N NaOH w celu zneutralizowania pH przed dodaniem 3 ml trypsynizowane VSMC (WT, P311 p / P i P311 wektor ekspresyjny P transfekowany P311 p / P 3 x 105 komórek / ml) w pożywce hodowlanej. Zmieszany roztwór żelu kolagenowego odlano na 60-mm plastikowe płytki do hodowli (4 ml / półmiski). Po inkubacji w 37 ° C przez 30 minut, spolimeryzowane żele oddzielono i pokryto 4 ml DMEM z 10% FBS. Kraty sfotografowano po 7 dniach i obliczono amplitudę skurczu żelu. Do celów leczenia, spolimeryzowane żele inkubowano z normalnymi pożywkami zawierającymi rTGF-pi, rTGF-a2, rTGF-a3 lub rTGF-a 1-3 w stężeniu 10 ng / ml. Analiza Western blotting. Lizaty aorty i hodowane lizaty VSMC aorty (20. G białka całkowitego) rozdzielono na żelach SDS-PAGE i przeniesiono na membrany nitrocelulozowe (BioRad) do analizy immunoblottingu. Abs wobec P311 (44, 45), TGF-ys, LAP-1 (R & D Systems), c-Myc (Sigma-Aldrich), MYPT1 (Cell Signaling Technology), fosfo-MYPT1 (T696, Santa Cruz) i GAPDH (Santa Cruz) zostały użyte do wykrycia docelowych białek. Do detekcji sygnału chemiluminescencyjnego wykorzystano system wykrywania Western blot ECL Plus (GE Healthcare). Statystyka. Wszystkie eksperymenty powtarzano co najmniej 3 razy, a dane przedstawiono jako średnie. SD. Różnice między 2 grupami i terapiami określano za pomocą jednoczynnikowej ANOVA lub testu dwustronnego ucznia. Wartość AP 0,05 lub mniej została uznana za statystycznie istotną. Zatwierdzenie badania. Wszystkie przeprowadzone tu procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez University of Chicago IACUC zgodnie z wytycznymi NIH. Wszystkie protokoły dla ludzkich tkanek zostały zatwierdzone przez University of Chicago IRB zgodnie z wytycznymi NIH. Wszystkie tkanki ludzkie zostały uzyskane z Human Tissue Resource Center na Uniwersytecie w Chicago (i dlatego mają deidentifiers); nie była wymagana zgoda pacjenta. Materiały uzupełniające Przegląd danych uzupełniających Podziękowania Dziękujemy firmie Harry C. Dietz za dostarczenie transgenicznych myszy CAGA12 / GFP i Yee Wong za doskonałą pomoc techniczną przy wykonywaniu badań ciśnieniowych. Praca ta została wsparta przez NHLBI udziela HL-48730, HL-77514 i HL-78752 L. Schugerowi. KR Badri jest Amerykańskim Stowarzyszeniem Chorych na Płuc (ang. Interstitial Lung Disease Scholar) (Dalsemer Research Award, DA-196629-N). Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Uwaga dotycząca oceny tego manuskryptu: Rękopisy autorstwa naukowców związanych z Uniwersytetem Duke, Uniwersytetem Karoliny Północnej w Chapel Hill, Duke-NUS i Instytutem Medycznym Sanford-Burnham są obsługiwane nie przez członków redakcji, lecz przez redaktorzy naukowi, którzy konsultują się z wybranymi zewnętrznymi redaktorami i recenzentami. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2013; 123 (10): 4502. 4512. doi: 10,1172 / JCI69884. Obecny adres Kameswara Rao Badri to: Biuro Sponsorowanej Administracji Badawczej, Savannah State University, Savannah, Georgia, USA.
[przypisy: wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, zss kolbuszowa dolna, redukcja tkanki tłuszczowej dieta ]
[przypisy: syrop tymiankowy złożony, narodowy fundusz zdrowia w łodzi, przychodnia ożarów mazowiecki ]