Homeostaza ciśnienia krwi jest utrzymywana przez P311 TGF- oś ad

Morphometry nie wykazały różnic między P311. /. i myszy WT. Determinacja telemetryczna ujawniła dzienne skurczowe i rozkurczowe ciśnienie krwi wynoszące 16,5. 3 i 14. 5 mmHg niżej, odpowiednio, w P311. /. myszy niż u myszy WT, z nieznacznie zwiększonymi różnicami nocnymi (Figura 1A). Badania echokardiograficzne przeprowadzone u przytomnych myszy wykazały powiększoną średnicę aorty w P311. /. zwierzęta, które zniknęły w znieczuleniu ogólnym (ryc. 1B). Nie stwierdzono istotnych różnic w innych parametrach echokardiograficznych, z wyjątkiem zwiększonego rzutu serca (Suplementalna Figura 2). Łącznie odkrycia te sugerowały obniżenie napięcia mięśniowego, co zostało potwierdzone przez badanie ciśnieniowe przy użyciu tętnic oporowych (średnica około 150 .m) (Figura 1C i Dodatkowa Figura 3). Badania myograficzne na izolowanych aortach wykazały zmniejszoną kurczliwość w odpowiedzi na depolaryzację K + w P311. /. myszy (Figura 1E). Konsekwentnie, P311. /. Tętnice oporowe również wykazywały zmniejszoną kurczliwość w odpowiedzi na K + i agonistów układu zwężenia naczyń (noradrenalina, fenylefryna, epinefryna i angiotensyna II), bez żadnej różnicy w odpowiedzi na wazodilatację względem hydralazyny (Figura 1E i Dodatkowa Figura 4, AEE). P311. /. aorty wykazały zmniejszoną aktywność RhoA, co oceniono na podstawie poziomów RhoA-GTP, jak również fosforylowanej frakcji MYPT1 (Figura 1F). Testy skracania żelu kolagenowego wykazały, że VSMC są izolowane z P311. /. aorty były mniej wydajne pod względem skurczu żeli kolagenowych niż te pochodzące ze zwierząt WT, ale ich skurcz poprawił się po transfekcji P311 (Figura 1, G i H). Rysunek 1P311. /. u myszy wystąpiło systemowe niedociśnienie i zmniejszone napięcie mięśni naczyniowych, kurczliwość i aktywność RhoA. (A) Telemetryczne oznaczanie systemowego ciśnienia krwi w WT i P311. /. myszy (n = 8 na grupę). (B) Echokardiograficzne obrazy średnicy aortalnej u przytomnych i znieczulonych myszy (n = 8 na grupę). Pokazano również średnią średnicę aorty. (C) Ciśnieniowe oznaczanie miogenu w tętnicach oporowych (n = 4 na grupę). (D) Myogenny ton tętnic oporowych w odpowiedzi na 50 mM KCl pod ciśnieniem 75 mmHg. (E) Drutowe badanie miograficzne odpowiedzi skurczowej aort (n = 4 na grupę) i tętnic oporowych (n = 3 na grupę) na zwiększenie stężenia K +. (F) Test aktywności RhoA pokazujący aktywny RhoA i Western blot pokazujący całkowity i ufosforylowany (p-) MYPT1. Eksperymenty przeprowadzono 3 razy z podobnymi wynikami. Względna gęstość sygnału Western blot w P311. /. w stosunku do myszy WT (analizowanych przez oprogramowanie myImageAnalysis, Thermo Scientific). (G) Skurcz żelowy kolagenu przez VSMCs pochodzące z myszy aorty. (H) Skurczenie żelu kolagenowego przez VSMC pochodzące z WT i P311. /. aorty, te ostatnie transfekowane pustym wektorem (EV) lub wektor P311 (60% skuteczność transfekcji). W G i H względny skurcz obliczono jako procentowe zmniejszenie średnicy żelu kolagenu od pierwotnej średnicy. Dane dotyczące skurczu żelu pobrano z potrójnych studzienek. Dane reprezentują średnią. SD. * P <0,05, ** P <0,01, test końcowy ucznia. P311. /. myszy mają obniżony poziom i aktywność TGF-y, ale nie odpowiadają odpowiednim mRNA. Chociaż w czasie rzeczywistym w reakcji PCR wykazano podwyższony poziom mRNA Tgfb1, Tgfb2 i Tgfb3 w tkankach aorty izolowanych z P311 P / l. myszy, ELISA wykazała, że całkowite i aktywne poziomy białka w 3 izoformach były znacznie zmniejszone w ekstraktach tkankowych i w próbkach osocza z P311 P / l. myszy (Figura 2, ACH). Analizy immunoblotów wykazały zmniejszoną ekspresję proTGF-a1, proA TGF-a2, proA TGF-a3 i LAP-1 (figura 2D). Odkryliśmy, że blokowanie TGF-. aktywność skutkowała zmniejszeniem odpowiedzi skurczowej WT i P311. /. arterie odpornościowe pochodzące od myszy. Spadek ten był statystycznie istotny tylko w tętnicach WT, które miały więcej TGF-y. niż ich P311. /. odpowiedniki (rysunek 2E). Hodowle VSMC wykazywały również podwyższone poziomy mRNA Tgfb1, Tgfb2 i Tgfb3, podczas gdy poziomy białka były zmniejszone (Suplemental Fig. 5, A i B). Zgodnie z tymi ustaleniami, zmniejszyła się również fosforylacja trangionalnych koregatorowych Smad2 i Smad3 (Figura 2F). Myszy niosące aktywny TGF-. konstrukt reporterowy, CAGA12 / GFP, wykazał niższą aktywność w P311. /. w porównaniu do zwierząt P311 + / + (Figura 2G). P311. /. VSMC wyizolowane z aort transgenicznych myszy CAGA12 / GFP również wykazywały utratę TGF-a. aktywność względem kontroli WT (dodatkowa Figura 5C). Rysunek 2P311. /. myszy mają obniżony poziom i aktywność TGF-a1, TGF-a2 i TGF-a3 i ich preform, ale nie w odpowiednich mRNA. (A) Real-time PCR pokazujący poziom mRNA dla Tgfb1, Tgfb2 i Tgfb3 w aortach WT i P311. /. myszy [patrz też: kolbuszowa dolna, suplementy na wypadanie włosów, syrop tymiankowy złożony ] [patrz też: polskie towarzystwo ultrasonograficzne, stężenie alkoholu we krwi kalkulator, kalendarz triathlon 2015 ]