Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in ad

Dane te wskazują, że aspekty fenotypu Kennedy ego uprzednio przypisane częściowej utracie funkcji AR są w rzeczywistości za pośrednictwem toksyczności powodowanej przez rozszerzony układ glutaminowy. Tutaj scharakteryzujemy fenotyp nerwowo-mięśniowy myszy AR113Q. Zmutowane samce wykazują osłabienie nerwowo-mięśniowe zależne od androgenu. Patologia mięśni szkieletowych poprzedza patologiczne zmiany w rdzeniu kręgowym, wykazuje dowody zarówno działania miopatycznego, jak i atrofii neurogennej, w której pośredniczy rozszerzony glutaminowy AR, i odtwarza mieszane cechy wcześniej opisane w mięśniu Kennedyego (29, 30). Samce AR113Q niespodziewanie umierają w młodym wieku, a nasze analizy wskazują na zmienioną pobudliwość błony mięśniowej w patogenezie. Continue reading „Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in ad”

Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in

Choroba Kennedy ego, zaburzenie zwyrodnieniowe charakteryzujące się osłabieniem nerwowo-mięśniowym zależnym od androgenu, jest spowodowana ekspansją CAG / glutamina w genie receptora androgenowego (Ar). Opracowaliśmy mysi model choroby Kennedy ego, wykorzystując ukierunkowanie genów do konwersji mysiego receptora androgenowego (AR) na sekwencję ludzką, jednocześnie wprowadzając 113 glutamin. U myszy AR113Q rozwinęła się zależna od długości nerwowo-mięśniowa zależność od długości hormonów i glutaminy, charakteryzująca się wczesnym pojawieniem się miopatycznej i neurogennej patologii mięśni szkieletowych oraz późnym rozwojem neuronalnych inkluzji wewnątrzjądrowych w neuronach kręgowych. Samce AR113Q niespodziewanie zmarły po 2. 4 miesiącach. Continue reading „Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 9

W celu preinkubacji komórek Raji-DC-SIGN z ludzkim mlekiem, rozcieńczenie ludzkiego mleka (1: 4) lub PBS zawierającego 10% FCS inkubowano z 0,27 x 106 komórek Raji-DC-SIGN w formacie 24-studzienkowym przez godzinę. godzinę w 37 ° C przed płukaniem PBS i dodaniem SF-162 (2,8 log TCID50 / ml). Komórki inkubowano przez 2 godziny przed płukaniem i dodaniem x 106 komórek / studzienkę limfocytów wzbogaconych w CD4 +, przy czym produkcja CA-p24 była mierzona w teście adhezji kulek w dniu 15. gp120. Kulki przygotowano jak opisano poprzednio (6). Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 9”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 8

Frakcję lekką, głównie z monocytami, zebrano, przemyto i zaszczepiono w 24-studzienkowych lub 6-studzienkowych płytkach do hodowli o gęstości odpowiednio 5 x 105 komórek lub 2,5 x 106 na studzienkę. Po 60 minutach w 37 ° C, komórki adherentne hodowano w celu otrzymania iDCs w zmodyfikowanej przez Iscove. S pożywce Dulbecco (IMDM) z gentamycyną (86. G / ml) i 10% surowicą klonu płodowego (HyClone) uzupełnioną GM- CSF (500 U / ml) i IL-4 (250 U / ml). Pożywkę hodowlaną odświeżono w dniu 3, przy czym dojrzewanie komórek indukowano w dniu 6 przez hodowlę z poli (I: C) (20 .g / ml, Sigma-Aldrich). Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 8”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 7

Multimeryczny LeX nie był w stanie hamować perełek powleczonych gp120 wiążących się z komórkowym DC-SIGN, prawdopodobnie z powodu wysokiej awidności tego oddziaływania lub różnicy w interakcji monomerycznej ekspresji gp120 na perełki fluorescencyjne w porównaniu do trimerycznej ekspresji gp120 na cząstka HIV-1. Obserwowana różnica w zdolności LeX Ab do blokowania działania hamującego ludzkiego mleka w teście transferu Raji-DC-SIGN i badaniu ELISA jest prawdopodobnie wynikiem różnic w konfiguracji DC-SIGN. Na powierzchni komórki DC-SIGN występuje w postaci tetrameru, podczas gdy w teście ELISA DC-SIGN-Fc receptor najprawdopodobniej jest monomerem lub dimerem, co może prowadzić do słabszej interakcji. Te różnice w konfiguracjach cząsteczek DC-SIGN testowanych w różnych testach sugerują, że należy zachować ostrożność podczas interpretacji wyników. W poprzednich badaniach odnotowano, że miejsca wiązania LeX i gp120 są odrębne, ale zachodzą na siebie (54, 56, 63). Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 7”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 6

Najprawdopodobniej PAA-LeX i LeX-BSA są zdolne do blokowania trimerycznego oddziaływania gp120, podczas gdy wiązanie DC-SIGN do monomerycznego gp120 eksprymowanego na fluorescencyjnych perełkach jest nadal możliwe. Z powodu niemożności powlekania sacharydów na płytkach w teście ELISA wiązania DC-SIGN-Fc, testowaliśmy tylko LeX-BSA i kontrolę BSA. LeX-BSA rzeczywiście wykazuje wiązanie z DC-SIGN-Fc, podczas gdy BSA nie wykazuje wiązania, co wskazuje, że wiązanie DC-SIGN-Fc jest specyficzne dla LeX (Figura 8B). Figura 8Multimeryczny i związany z białkiem lek LeX hamuje transfer wirusowy za pośrednictwem DC-SIGN. (A) Kilka związków zawierających LeX wykazało różnicę w ich zdolności do blokowania zależnego od DC-SIGN. Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 6”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 5

Przetestowaliśmy zatem ludzką laktoferynę, bydlęcą a-kazeinę, ludzki lizozym, ludzką (3-laktoalbuminę i ludzki SLPI, które, jak wykazano, mają działanie modulacyjne na replikację HIV-1 in vitro (44-59). Wszystkie te związki testowano w teście adhezji perełek gp120 i ELISA wiązania DC-SIGN-Fc (Figura 6). Żaden z badanych związków mleka kobiecego nie może hamować wiązania gp120 z Raji-DC-SIGN lub iDCs (Figura 6, A i B, odpowiednio). Ponadto DC-SIGN-Fc nie wykazuje wiązania z wybranymi związkami mlecznymi (Figura 6C). Jako kontrolę użyto laktoferyny bydlęcej, która poprzednio wiązała DC-SIGN i zapobiegała przenoszeniu wirusa (58). Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 5”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + czesc 4

Komórki DC-SIGN-dodatnie i pozorowane komórki Raji inkubowano z buforem jako kontrolą. W celu określenia specyficzności obserwowanego wiązania, komórki inkubowano z AZN-D1, EGTA i mannanem przed dodaniem perełek gp120. * P <0,05 w porównaniu ze sterowaniem PBS. (C) Ludzkie mleko (1:20) pokryto przed dodaniem DC-SIGN-Fc. Specyficzność obserwowanego wiązania określono przez preinkubację DC-SIGN-Fc z AZN-D1 i EGTA. Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + czesc 4”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + cd

W dniu 7 stężenia CA-p24 określono standardowym testem ELISA. Procentowe hamowanie określono w odniesieniu do stężenia CA-p24 odpowiedniego wzbogaconego kontrolnego PBS. Ludzki związek (e) mleka wiąże się z DC-SIGN, zapobiegając w ten sposób przeniesieniu HIV-1 do limfocytów T CD4 +. Aby ustalić, czy hamujący wpływ ludzkiego mleka na transfer wirusowy, w którym pośredniczy Raji-DC-SIGN, był spowodowany interakcją mleka ludzkiego z HIV-1 lub DC-SIGN, przeprowadziliśmy eksperymenty z inkubacją wstępną zarówno komórek Raji-DC-SIGN, jak i HIV. z ludzkim mlekiem. Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + cd”

Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad

Wiele epitopów cukrowych występujących w ludzkim mleku składa się z grupy antygenów Lewisa, w tym Lewisa X (LeX) i Lewisa Y (LeY) (53), które mogą stanowić część większego oligosacharydu, niezależnie od tego, czy cukier jest związane z białkiem lub nie. Epitop LeX (GalA 1-4 [Fuc. 1-3] GlcNAc-R) jest również zawarty w reszcie cukrowej LNFP III. Ten sam epitop cukrowy został zidentyfikowany w płynach ustrojowych, w tym ślinie, krwi i ludzkim mleku, a także wykazano, że jest obecny w wielu patogenach (21) i ekstraktach z patogenów (54). Wykazano, że niektóre z ludzkich oligosacharydów chronią przed toksynami i patogenami związanymi z chorobami wieku dziecięcego (55). Continue reading „Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad”