Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 5

MDA5 ulega ekspresji w wysepkach przed infekcją i indukowany w obu wysepkach i trzustce zewnątrzwydzielniczej po zakażeniu. (D) Ekspresja TLR3 w trzustce. Zamrożone skrawki tkanek wytworzono z WT i Tlr3a /. trzustki od niezakażonych zwierząt (pierwszy, drugi i czwarty panel) lub z trzustki WT 12 godzin po zakażeniu EMCV (trzeci panel). Skrawki wybarwiono anty-TLR3 (brązowy) lub barwiono anty-TLR3 (brązowy) i synaptofizyną (niebieski) w celu uwidocznienia ekspresji w wysepkach (trzeci panel) i pokazano przy różnych powiększeniach jak wskazano (oryginalne powiększenie, x 200, skala paski: 100 mikronów, oryginalne powiększenie, × 400, paski skali: 50 mikronów, oryginalne powiększenie, × 600, paski skali: 33 mikronów) (n = 3). Continue reading „Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 5”

Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy czesc 4

Zgodnie z tym, Mda5. /. myszy wykazały rozsiewane wybarwienie antygenu zarówno w trzustce wewnątrzwydzielniczej, jak i zewnątrzwydzielniczej, jak również znaczną naciek zapalny wysepek (Figura 3, D i E). Biorąc pod uwagę te zmiany histopatologiczne, stwierdzenie, że Mda5. /. Continue reading „Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy czesc 4”

Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy cd

Nasze eksperymenty sugerują, że MDA5 odgrywa dominującą rolę w ochronie przed zapaleniem mięśnia sercowego wywołanego EMCV-D, z podrzędnym wkładem TLR3. Figura 2MDA5 kontroluje zakażenie EMCV-D w sercu. Myszy WT i KO zakażono 103 PFU z EMCV-D. Surowicę i serce (n = 6 na punkt czasowy, 3 niezależne eksperymenty) zebrano w dniach 2, 4 i 7 z myszy, które przeżyły i oceniono na poziomy (A) troponiny za pomocą testu ELISA i miana wirusa (B) za pomocą testu łysinkowego lub ustalono w formalinie i parafinie osadzonej dla histologii. Skrawki tkanek wybarwiono na obecność antygenu EMCVpol metodą immunohistochemiczną (C) (lewa kolumna: oryginalne powiększenie, x 100-krotne powiększenie, pręty skali: 200 mikronów, prawidłowa kolumna: oryginalne powiększenie, x 400; pręty skali: 50 mikronów) lub zabarwione H & E i oceniono w przypadku patologii (D) (oryginalne powiększenie, x 100, pasek skali: 200 mikronów). Continue reading „Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy cd”

Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad

EMCV-D ma preferencyjny tropizm dla trzustki. komórki i może indukować cukrzycę u selektywnych szczepów myszy, takich jak DBA / 2 (45, 46), a także wywoływać zapalenie mięśnia sercowego. Względne role MDA5 i TLR3 w zakażeniu EMCV są dość kontrowersyjne. Wstępne badania wykazały, że MDA5 jest niezbędny do ochrony przed letalnym zakażeniem EMCV, podczas gdy TLR3 był zbędny (47, 48); jednak kolejne badanie sugerowało, że TLR3 zapewnia ochronę przed zapaleniem mięśnia sercowego wywołanego EMCV (49). Przeanalizowaliśmy zakażenie EMCV-D w Mda5 (3 (3, Tlr3 (3/3, i Mda 5 (3/3 Tlr 3 (3). Continue reading „Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad

W ostatnich pracach wykazaliśmy, że w stymulacji HDL eNOS pośredniczy aktywacja kinazy rodziny Src, PI3K, kinazy Akt i MAPK oraz fosforylacja eNOS w Ser1179 (14). Tak więc, HDL indukuje wiele procesów sygnałowych, które mogą być kluczowe dla miażdżycowych właściwości lipoproteiny. Jednak najbardziej bliższe zdarzenia leżące u podstaw sygnalizacji inicjowanej przez HDL nie zostały jeszcze wyjaśnione. Celem niniejszego badania było określenie podstawy molekularnej zdarzenia sygnalizacyjnego indukowanego przez HDL poprzez SR-BI poprzez badanie mechanizmów proksymalnych w aktywacji eNOS HDL. Eksperymenty zostały zaprojektowane w celu określenia, czy sygnalizacja wymaga rozpoznanej funkcji HDL do powodowania przepływu cholesterolu do lub z komórek i do ograniczania strukturalnych cech SR-BI niezbędnych do transdukcji sygnału. Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL

Wiązanie się HDL z receptorem zmiatającym BI (SR-BI) pośredniczy w ruchu cholesterolu. HDL indukuje również liczne sygnały komórkowe, które w śródbłonku zachodzą poprzez SR-BI i zbiegają się w celu aktywacji eNOS. Aby określić podstawę molekularną zdarzenia sygnałowego indukowanego przez HDL, zbadaliśmy mechanizmy proksymalne w aktywacji eNOS HDL. W komórkach śródbłonka HDL i metylo-y-cyklodekstryna powodowały porównywalną aktywację eNOS, podczas gdy obciążona cholesterolem metylo- (3-cyklodekstryna nie miała wpływu. Fosforydyna obciążona fosfatydylocholiną powodowała większą stymulację niż natywny HDL, a blokowanie przeciwciała przeciw SR-BI, które zapobiega wypływowi cholesterolu, zapobiegało aktywacji eNOS. Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL”

Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 9

Poziomy IFN w surowicy określono w teście biologicznym (60). W skrócie, komórki L929 inkubowano przez 24 godziny ze wzorcami lub próbkami, a następnie infekowano VSV-GFP przez 10 godzin. Komórki utrwalono i procent komórek GFP + oznaczony metodą cytometrii przepływowej zastosowano do obliczenia poziomów IFN w liniowym zakresie krzywej standardowej. Ta metoda dała wyniki podobne do wyników IFN-y ELISA (PBL, dane nie przedstawione), ale był bardziej czuły na niskie wartości IFN. Histologia. Continue reading „Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 9”

Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 8

Sugerowano, że wirusy i dsRNA mogą wywoływać cukrzycę poprzez przedłużone wytwarzanie IFN-I, które promuje autoimmunologiczne odpowiedzi komórek T (30). Zgodnie z tą hipotezą, badania genetyczne na ludziach wykazały, że rzadkie allele MDA5, które są defektywne w produkcji IFN-I, korelują z ochroną przed rozwojem T1D (41. 44). W oczywisty sposób kontrastują z tymi badaniami, stwierdziliśmy, że upośledzenie wykrywania odpowiedzi EMCV-D i IFN-I u myszy, które nie mają TLR3 w komórkach krwiotwórczych powoduje cukrzycę. W tym przypadku jednak cukrzyca jest wywołana przez wirusy. Continue reading „Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 8”

Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 7

We wczesnych punktach czasowych, wysepki trzustkowe Tlr3. /. myszy wykazywały wyraźne wybarwianie na antygen wirusowy w porównaniu z myszami WT, potwierdzającymi wirusowe dane miana (Figura 3D). Dodatkowo wysepki z zainfekowanego Tlr3. /. Continue reading „Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 7”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 7

Chimera składająca się z CD36 z C-końcową domeną cytoplazmatyczną SR-BI dodawana do C-końca (CD / SRCT, Figura 6) nie powodowała fosforylacji lub aktywacji eNOS, co wskazuje, że C-końcowa domena cytoplazmatyczna SR- BI nie jest wystarczający do indukowania sygnalizacji HDL. Jednakże chimera oparta na CD36 z C-końcowymi domenami transbłonowymi i cytoplazmatycznymi SR-BI (CD / SRCTMT, Figura 6) wykazała fosforylację i aktywację eNOS porównywalną do fosforylacji typu dzikiego SR-BI. Tak więc zarówno C-terminalne domeny transbłonowe, jak i oddziałujące z PDZ SR-BI są wymagane do sygnalizowania HDL. Ponadto, te obserwacje wskazują, że poziom wypływu cholesterolu indukowany przez CD36 jest wystarczający do pośredniczenia w sygnalizacji HDL, jeśli odpowiednie domeny SR-BI są obecne do przekazywania sygnału. Następnie zbadano podstawę dla C-końcowej domeny transbłonowej SR-BI do sygnalizacji. Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 7”