Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 6

Oprócz pośredniczenia w transporcie wstecznego cholesterolu, HDL inicjuje przekazywanie sygnałów w różnych typach komórek istotnych dla aterogenezy (11. 14). W niniejszym badaniu zbadaliśmy proksymalne zdarzenia w sygnalizacji HDL do eNOS i wykazaliśmy, że indukowany przez HDL wypływ cholesterolu i wiele domen SR-BI w wyjątkowy sposób pośredniczy w transdukcji sygnału. Ponieważ dożylne podanie odtworzonego HDL przywraca funkcję śródbłonka w tętnicy ramiennej pacjentów z hipercholesterolemią (33), a dożylna HDL stymuluje perfuzję mięśnia sercowego in vivo u myszy typu dzikiego, ale nie pozbawionych eNOS (34), zdarzenia inicjujące w sygnalizacji HDL do eNOS, które teraz wyjaśniliśmy, skutkują poprawą funkcji śródbłonka i zwiększeniem przepływu krwi wieńcowej. Postulujemy, że mechanizmy te mogą leżeć u podstaw zmniejszenia ryzyka chorób sercowo-naczyniowych zapewnianego przez HDL. Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 6”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 5

Ta chimera wykazywała wiązanie fotocholesterolu porównywalne do wiązania dzikiego typu SR-BI. Oceniano także zdolności SR-BII i SR-BI. 509 do wiązania fotocholesterolu. Zgodnie z oczekiwaniami w oparciu o wyniki przedstawione na Figurze 7B, oba fotocholesterol związany z SR-BII i SR-BI-A-509 (dane nie pokazane). Dodatkowo badano swoistość wiązania cholesterolu błonowego w osoczu z SR-BI w badaniach porównujących SR-BI, CD / SRCT i trzeciego członka rodziny receptorów zmiatających B, LIMP-II. Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 5”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL czesc 4

Do wykrywania aktywacji eNOS (na dole) stosowano równoległe zestawy transfekowanych komórek i mierzono konwersję [3H] L-argininy do [3H] L-cytruliny podczas 15-minutowych inkubacji z buforem kontrolnym lub HDL (50 ug / ml ). Wartości (średnia . SEM) wyrażono jako procent aktywności stymulowanej HDL powyżej podstawowej aktywności; n = 4. * P <0,05 versus SR-BI typu dzikiego. C-terminalna domena transbłonowa SR-BI i sygnalizacja HDL. Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL czesc 4”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL cd

Przeciwnie, aktywacja CD eNOS była podobna pod nieobecność lub obecność neutralizującego przeciwciała (stymulacja do 204%. 34% i 188%. 20% podstawowej aktywności, odpowiednio), co jest zgodne z funkcją CD niezależną od wiązania z SR -BI (20, 21). Aby jeszcze bardziej ustalić rolę dla wypływu cholesterolu, przeprowadzono doświadczenia z natywnym HDL i małymi jednowarstwowymi pęcherzykami (SUV) w komórkach COS-M6 eksprymujących eNOS i albo SR-BI typu dzikiego albo mutant AVI z SR-BI (Figura 3B). Podczas gdy receptor typu dzikiego pośredniczy w wydzielaniu do HDL lub SUV, mutant AVI jest zdolny do wypływu HDL, ale nie do SUV (22). Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL cd”

CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna cd

Mikroskopia kontrastu fazowego i znakowanie fluorescencyjne z użyciem ConA-FITC enterocytów jelita krętego od pacjenta z CD i kontroli. Oryginalne powiększenie, × 400. Tabela Zdolność różnych szczepów AIEC i odpowiadających im mutantów fimH do przylegania do granicy szczoteczki pierwotnych enterocytów jelita krętego wyizolowanych od pacjentów z CD szczepów AIEC wyrażonych odmianami pili typu 1. Poziom adhezji AIEC LF82 eksprymującej taki wariant pili typu był znacznie wyższy niż niepatogennego szczepu K-12 E. coli, w którym indukowano nadekspresję regularnego pili typu (Figura 2C). Continue reading „CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna cd”

CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna ad

Bakterie LF82 przylegały preferencyjnie do granicy szczoteczki z enterocytami jelita krętego wyizolowanymi od pacjentów CD (Figura 1A). Wskaźniki przylegania granicy grubości szczoteczki LF82 E. coli, odpowiadające średniej liczbie bakterii przylegających do granicy szczoteczki, wynosiły od 0,542 do 1,999 z enterocytami izolowanymi od pacjentów CD i od 0,096 do 0,511 z enterocytami od kontroli (Figura 1B). Zdolność szczepu AIEC LF82 do przylegania była zatem znacznie wyższa w przypadku enterocytów izolowanych od pacjentów CD niż w przypadku komórek kontrolnych (P = 0,0013). Potwierdza to pogląd, że u pacjentów z CD receptor związany z adhezją szczepu AIEC LF82 jest wyrażany na granicy szczoteczki enterocytów jelita krętego. Continue reading „CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna ad”

CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna

Błona śluzowa jelita krętego pacjentów z chorobą Crohna (CD) jest nieprawidłowo skolonizowana przez adherentno-inwazyjne E. coli (AIEC), które są zdolne do przylegania i najeżdżania komórek nabłonka jelitowego. Tutaj pokazujemy, że szczepy AIEC związane z CD przywierają do granicy szczoteczki pierwotnych enterocytów jelita krętego wyizolowanych od pacjentów CD, ale nie kontrolują bez choroby zapalnej jelit. Adhezja AIEC jest zależna od ekspresji pilusa typu na powierzchni bakterii i od ekspresji cząsteczki 6 adhezji komórkowej zależnej od antygenu rakowo-płodowego (CEACAM6) na wierzchołkowej powierzchni komórek nabłonka jelita krętego. Podaje się również, że CEACAM6 działa jako receptor dla adhezji AIEC i jest nieprawidłowo wyrażany przez komórki nabłonka jelita krętego u pacjentów z CD. Continue reading „CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 9

Oceniliśmy poziomy ekspresji różnych chimer SR-BI i CD36 i mutantów SR-BI w lizatach całych komórek, stosując przeciwciała poliklonalne SR-BI rozpoznające C-końcowe lub zewnątrzkomórkowe domeny receptora (Novus Biologicals Inc.). Ekspresję na powierzchni komórek oceniano przez biotynylację, immunoprecypitację z przeciwciałem przeciwko C-końcu SR-BI i sondowanie koniugatem streptawidyna-HRP. Ekspresję konstruktów pokrewnych LIMP-IIp oceniano po immunoprecypitacji za pomocą analizy immunoblot z poliklonalnym przeciwciałem anty-LIMP-II wytwarzanym u królika przeciwko peptydowi odpowiadającemu ostatniemu 15 aminokwasom mysiego LIMP-II. Wypływ cholesterolu. Upływ cholesterolu mierzono metodami poprzednio opisanymi gdzie indziej (16). Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 9”

Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 8

BAEC przygotowano i namnożono zgodnie ze standardowymi procedurami w pożywce EGM-2 (Biowhittaker Inc.). Eksperymenty przeprowadzono w pasażu 5. 8. Komórki COS-M6, które eksprymują nieznaczną ilość endogennego SR-BI i są pozbawione eNOS, utrzymywano w DMEM (Sigma-Aldrich) z 10% płodową surowicą cielęcą (Invitrogen Corp.). Komórki HEK 293 utrzymywano zgodnie z wcześniejszym opisem (48). Continue reading „Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 8”

CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna ad 8

Szczep LF82 E. coli, wyizolowany z przewlekłej zmiany jelita krętego pacjenta CD, zastosowano jako szczep referencyjny dla AIEC, a także 4 innych szczepów AIEC, LF31, LF71, LF73 i LF100 (12). Mutanty Pili-ujemne LF82 typu niosące insercję transpozonu Tn5phoA do fimA (52D11) lub genu fimH (ZG2) zostały wcześniej wygenerowane (14). Mutanty izogeniczne AIEC-a fimH wytworzono za pomocą produktu PCR, stosując metodę opisaną przez Datsenko i Wannera (44) i zmodyfikowaną przez Chaveroche i in. (45). Continue reading „CEACAM6 działa jako receptor adherentno-inwazyjnych E. coli, wspomagając kolonię błony śluzowej jelita cienkiego w chorobie Leśniowskiego-Crohna ad 8”