Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in ad 5

Następnie staraliśmy się określić mechanizm prowadzący do śmierci samców AR113Q. Chociaż wielu zmutowanych samców nagle stało się umierających i szybko zmarło, byliśmy w stanie zebrać surowicę od 4 zwierząt przed śmiercią. Ocena elektrolitów w surowicy, azotu mocznikowego we krwi i kreatyniny wykazała zmiany zgodne z niedrożnością dróg moczowych (wyraźnie podwyższonym poziomem azotu mocznikowego we krwi, kreatyniną i potasem, normalnym stężeniem sodu i chlorków, patrz Tabela 1). Te nieprawidłowości w chemii krwi i powtarzające się obserwacje podczas sekcji zwłok znacznie rozszerzonych, bez oznak fizycznych przeszkód, skłoniły nas do zbadania układu nerwowo-mięśniowego dolnych dróg moczowych. Badaliśmy rdzeń kręgowy mięśnia bulwiastego i mięśnia dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego jako jeden z elementów tego układu. Ten obwód nerwowo-mięśniowy utrzymuje się u samców gryzoni, ale nie u samic i pośredniczy w prawidłowym zachowaniu kopulacyjnym (36). Zarówno niższe neurony ruchowe tego układu, jak i mięśnie szkieletowe, które unerwiają ekspresjonują wysoki poziom białka AR i wymagają androgenów do przeżycia i prawidłowego funkcjonowania (36. 42). Tabela Samce Moribund AR113Q mają azotemiczne i hiperkalemiczne Badanie mięśni dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego u mężczyzn z AR113Q w wieku zaledwie 3 miesięcy ujawniło włóknie atroficzne z częstymi jądrami wewnętrznymi i wybitymi wstawkami wewnątrzjądrowymi AR (Figura 5A). Wtręty wewnątrzjądrowe AR występowały również w mięśniach wykastrowanych samców AR113Q, co wskazuje, że ich występowanie nie zależało od hormonów i nie korelowało z przedwczesną śmiercią. Mięśnie myszy WT i AR48Q pozbawione były zmian morfologicznych (nie pokazano). Ilościowa RT-PCR w czasie rzeczywistym wykazała znaczące podwyższenie poziomu mRNA a-podjednostki miogeniny i receptora acetylocholiny w mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego AR113Q, podczas gdy ekspresja mRNA MyoD nie była statystycznie różna od ekspresji WT (Figura 5B). Te zmiany ekspresji morfologicznej i ekspresji genów były podobne do obserwowanych w mięśniach kończyn tylnych (Figura 2, A i B) i były zgodne z patologią mieszaną, w której pośredniczy odnerwienie i miopatia. Skutki kastracji chirurgicznej na ekspresję genów w mięśniach dźwigacza odbytu i mięśnia bulwiastego były złożone i prawdopodobnie odzwierciedlały znakomitą wrażliwość zarówno mięśni, jak i neuronów motorycznych na androgeny. Kastracja chirurgiczna nie zmniejszyła znacząco ekspresji mRNA podjednostki a myogeniny i receptora acetylocholinowego u samców AR113Q i znacząco zwiększyła poziomy ekspresji mRNA MyoD i myogeniny u samców WT (Figura 5B). Dane te są zgodne z poglądem, że androgeny regulują ekspresję tych mRNA poprzez bezpośredni wpływ na mięśnie dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego lub pośredni wpływ na ich neurony neuronów ruchowych. Rycina 5 Mięśnie półkula lub mięśnia bulwiastego wykazują ciężką patologię u młodych samców AR113Q. (A) Reprezentatywne obrazy mięśnia dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego z samców WT i AR113Q. Powiększenie, × 400 (górny rząd). Częste immunoreaktywne wszczepienia wewnątrzjądrowe AR występowały w mięśniach myszy AR113Q, ale nie myszy WT. Powiększenie, × 1000 (środkowy rząd). Mięsień z wykastrowanych samców AR113Q zawierał również częste immunoreaktywne inkluzji wewnątrzjądrowych AR. Powiększenie, × 1000 (dolny rząd). (B) Zmieniona ekspresja miRNA i mRNA podjednostki a receptora acetylocholiny, ale nie mio MycD w mięśniu AR113Q. Względne poziomy ekspresji mRNA określono za pomocą ilościowej RT-PCR w czasie rzeczywistym. Dane pochodzą z WT (n = 7), AR113Q (n = 8) i wykastrowanych samców WT (n = 6) po 3. 5 miesiącach i chirurgicznie wykastrowanych samców AR113Q po 18 miesiącach (n = 4). Wyniki są podane jako średnie. SD w stosunku do ekspresji rsNA 18s. Różnice między WT i AR113Q są znaczące przy P <0,05 dla mRNA podjednostki a myogeniny i receptora acetylocholiny przez ANOVA z testem wielokrotnego porównania Neumana-Keulsa. Ekspresja mRNA MyoD nie różni się między WT i AR113Q. Następnie rozważaliśmy możliwość, że zmieniona pobudliwość mięśni szkieletowych w dolnych drogach moczowych może przyczynić się do niedrożności dróg moczowych u mężczyzn rasy AR113Q. Przeanalizowaliśmy 2 możliwe mediatory tego efektu, kanał chlorku mięśnia szkieletowego (CLCN1) i bramkowany napięciem sodowym IV, podjednostkę a kanału szkieletowego typu IV (Scn4a). Wiadomo, że odnerwienie zmniejsza ekspresję CLCN1 w mięśniach szkieletowych (31). Na pobudliwość błony mięśniowej wpływają zmiany w ekspresji CLCN1, o czym świadczą mutacje w kodującym genie Clcn1 u pacjentów z miotonią congenitą (43) oraz zmniejszona ekspresja białka CLCN1 u ludzi i mysie modele dystrofii miotonicznej (44. 46) [podobne: kolbuszowa dolna, redukcja tkanki tłuszczowej dieta, krem pod oczy z peptydami ] [hasła pokrewne: badanie kału na pasożyty, polskie towarzystwo ultrasonograficzne, stężenie alkoholu we krwi kalkulator ]