Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in ad 6

Podobnie mutacje w Scn4a wywołują u ludzi paramyotonia congenita, okresowy porażeniowy okres hiperkaliemiczny i gorączkę wywołaną potasem [47]. Mutacje te skutkują defektami wzmocnienia, dzięki czemu kanały przechodzą więcej prądu sodowego niż normalnie. Pośrednia immunofluorescencja ujawniła utratę ekspresji białka CLCN1 w mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego samców AR113Q (Figura 6A). Kastracja chirurgiczna, która zapobiegła przedwczesnej śmierci samców AR113Q, przywróciła ekspresję CLCN1. W przeciwieństwie do mięśni dźwigacza ani mięśnia bulwiastego, mięśnie szkieletowe tylnych kończyn u mężczyzn AR113Q wyrażały łatwo wykrywalne poziomy białka CLCN1. Figura 6 Zależne od estrogenów obniżenie ekspresji CLCN1 i SCN4A w mięśniu szkieletowym AR113Q. (A) Pośrednia immunofluorescencja demonstruje ekspresję białka CLCN1 (czerwony) w dźwigaczu odbytu / bulwiastokrzewiach (LA / BC) i mięśniach kończyn tylnych WT, AR113Q i wykastrowanych samcach AR113Q. Jądra barwiono DAPI. (B. D) Względne poziomy ekspresji mRNA CLCN1 (B i C) i SCN4A (D i E) w mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego (B i D) i mięśniach kończyn tylnych (C i E) WT (n = 8), AR113Q (n = 9) i wykastrowane samce WT (n = 6) po 3-5 roku i wykastrowane samce AR113Q po 18 miesiącach (n = 4). Dane są zgłaszane jako średnie. SD w stosunku do ekspresji rsNA 18s. Różnice między WT i AR113Q są znacząco różne w kończynach tylnych (P <0,01 dla CLCN1) i mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego (P <0,001 dla CLCN1 i SCN4A), jak określono za pomocą ANOVA w teście wielokrotnego porównania Neumana-Keulsa. Poziomy SCN4A w mięśniach kończyn tylnych nie różnią się znacząco. Zmniejszona ekspresja białka CLCN1 wynikała z niższych poziomów mRNA CLCN1. Ilościowa RT-PCR w czasie rzeczywistym wykazała, że poziomy mRNA w mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego u mężczyzn z AR113Q zostały zmniejszone do około 25% mężczyzn WT i że ten deficyt został częściowo skorygowany przez chirurgiczną kastrację (Figura 6B). Nie uzyskano dowodów na nieprawidłowe składanie mRNA eksonów 7a i 8a (nie pokazano). Podobne zmiany w akumulacji mRNA CLCN1 obserwowano również w mięśniach kończyn tylnych AR113Q (Figura 6C). Ciągła ekspresja białka CLCN1 w tym mięśniu prawdopodobnie odzwierciedla to, że mięśnie kończyn wykazywały mniej poważny spadek w akumulacji mRNA CLCN1 niż mięśnie dźwigacza ani mięśnia bulwiastego. Nie można wykluczyć dodatkowego wpływu na procesy, które regulują ekspresję kanału w mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego, takich jak translacja i przemyt do błony komórkowej. Podobny wpływ androgenny na ekspresję mRNA SCN4A wykazano w mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego samców AR113Q (Figura 6D). Przeciwnie, mRNA SCN4A wyrażana w mięśniach kończyn dolnych AR113Q był na poziomie WT (Figura 6E). Pośrednia immunofluorescencja ujawniła wzorce ekspresji kanału sodowego w mięśniku dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego i mięśniach kończyn tylnych, które były podobne do obserwowanych dla CLCN1 i które równolegle zmieniały ekspresję mRNA SCN4A (nie pokazano). Aby ustalić, czy mięsień szkieletowy AR113Q wykazuje zmienioną pobudliwość elektryczną, wykonaliśmy elektromiografię igłową na mięśniach kończyn tylnych i dźwigaczach / mięśach bulwiastych (ryc. 7A). Wszystkie badane samce AR113Q miały nieprawidłową aktywność elektryczną wywołaną wprowadzeniem igły, składającą się z fal dodatnich oscylujących w amplitudzie przez ponad 300 ms, charakterystycznych dla wyładowań miotonicznych. Nieprawidłową aktywność insercyjną obserwowano częściej w mięśniach dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego niż w mięśniach kończyn tylnych u mężczyzn AR113Q i nie odnotowano ich w żadnej grupie mięśniowej mężczyzn WT. Dodatkowo, nienormalną spontaniczną aktywność wskazującą na odnerwienie odnotowano u wszystkich mężczyzn AR113Q zarówno w mięśniu dźwigacza odbytu, jak i mięśniu grzbietowym i kończynach tylnych (Figura 7A). Nienormalna aktywność spontaniczna polegała na utrzymywaniu i utrzymywaniu regularnego odpalania fal dodatnich, które występowały z małą częstotliwością (<30 Hz). Nieprawidłową spontaniczną aktywność obserwowano częściej w mięśniu dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego (około 50% wstawek igieł) niż w mięśniach kończyn tylnych (około 25% wstawek igłowych). Nie wykryto nieprawidłowej spontanicznej aktywności u myszy WT. Tak więc elektromiografia igłowa wykazała aktywność elektryczną w mięśniu szkieletowym AR113Q, co wskazuje zarówno na procesy miopatyczne, jak i neurogenne. Ryc. 7 Zmiany eklektrofizjologiczne i ekspresja genów wskazują na miopatię u mężczyzn z AR113Q. (A) Złożone obrazy z sekwencyjnych ramek wideo z elektromiografii igłowej na mięśniku dźwigacza odbytu / mięśnia bulwiastego i mięśniach kończyn tylnych od mężczyzn WT i AR113Q po 3 do 5 miesięcy [hasła pokrewne: kalendarz triathlon 2015, badanie kału na pasożyty, stężenie alkoholu we krwi kalkulator ] [więcej w: kalendarz triathlon 2015, krem pod oczy z peptydami, sok z buraka właściwości ]