Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in ad 8

Pojawiające się dowody w kilku modelach układów chorób neurodegeneracyjnych ujawniły ważny wkład w fenotyp choroby poprzez niezależne od komórek szlaki toksyczności. Niedawne badanie warunkowego mysiego modelu choroby Huntingtona, które nadmiernie eksprymowało zmutowany ekson huntingtyny w pewnych populacjach neuronalnych sugerowało, że patologiczne interakcje komórkowe były krytyczne dla rozwoju korowej neuronalnej patologii (50). Podobne dane uzyskano z badania rodzinnego stwardnienia zanikowego bocznego wynikającego z mutacji w dysmutazie ponadtlenkowej Cu / Zn (SOD1). Wyniki badań w kilku transgenicznych modelach myszy wykazały, że zmutowane białko SOD1 działające w komórkach nienauronalnych jest toksyczne dla neuronów ruchowych (51), w tym mikrogleju (52). Wyniki te pomagają wyjaśnić, dlaczego specyficzna dla neuronu transgeniczna ekspresja zmutowanego SOD1 była niewystarczająca do wywołania degeneracji neuronów ruchowych u myszy (53, 54). Przyszłe badania z zastosowaniem systemów modelowych, które wyrażają zmutowane białka pełnej długości na poziomach endogennych w sposób specyficzny dla komórki, pomogą definitywnie rozwiązać ten problem. Dane te wskazują, że patologiczne interakcje komórkowe odgrywają istotną rolę w fenotypie choroby w różnych modelach zaburzeń neurodegeneracyjnych charakteryzujących się agregacją białek. Pokazane tu efekty miopatyczne sugerują, że podobne mechanizmy przyczyniają się do rozwoju choroby Kennedy ego. Mięsień tylny kończyn AR113Q wykazywał znacznie niższe poziomy mRNA kodującego czynniki neurotropowe NT-4 i GDNF, co wskazuje, że utrata wsparcia troficznego z chorego mięśnia może przyspieszyć dysfunkcję i degenerację neuronów motorycznych. Te neurotroficzne czynniki pochodzące od mięśni mogą modulować progresję choroby neuronu ruchowego, wykazano przez zwiększone przeżycie neuronu ruchowego u myszy z mutacją SOD1, w których pośredniczy transgeniczna ekspresja IGF-1 w mięśniu (55). Nasze dane wskazują, że procesy miopatyczne mogą przyczyniać się do progresji choroby Kennedy ego i że mięsień szkieletowy może być celem terapeutycznym w leczeniu pacjentów z tym zaburzeniem. Metody Odmiany myszy. Uzyskane myszy z docelowymi allelami Ar zawierającymi 21, 48 lub 113 powtórzeń CAG w eksonie opisano wcześniej (27, 28). Ponowna analiza wektora docelowego użytego do wytworzenia myszy AR48Q (wcześniej zidentyfikowano jako AR41Q) ujawniła obecność 48 zamiast 41 powtórzeń CAG. Myszy wytworzono przez rekombinowanie części ludzkiego eksonu obejmującej aminokwasy 31 (484 z mysim genem Ar w embrionalnych komórkach macierzystych CJ7. Męskie chimery krzyżowano z samicami C57BL / 6J, a samice heterozygotyczne dla docelowego allelu Ar hodowano z samcami WT C57BL / 6J w celu wytworzenia myszy N2 i N5 stosowanych w tym badaniu. Wszystkie procedury z udziałem myszy zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Stosowania i Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu Michigan, zgodnie z wytycznymi NIH dotyczącymi opieki i wykorzystywania zwierząt eksperymentalnych. Manipulacja hormonalna. Samce myszy poddano orchiektomii w wieku 5-6 tygodni. Po indukcji znieczulenia izofluranem, brzuch został oczyszczony i ogolony, a nacięcie o długości cm wykonano na poziomach nóg. Nasieniowacz i nasadkę nasienną wizualizowano i podwiązano za pomocą wchłanialnego materiału nici, usunięto jądra i nacięcie zamknięto za pomocą chirurgicznego kleju. Peletki zawierające 12,5 mg testosteronu lub kontroli nośnika zaprojektowanych do 90-dniowego uwalniania otrzymano z Innovative Research of America. Te peletki wszczepiono podskórnie na grzbietowej powierzchni myszy za pomocą oseara. Analiza siły przyczepności. Myszy przyniesiono do testowni i pozwolono im się zaaklimatyzować przez 10 minut. Miernik siły chwytu (Columbus Instruments) został wykorzystany do pomiaru siły chwytu przedniej kończyny. Miernik siły uchwytu ustawiono poziomo, a myszy trzymano za ogon i opuszczano w kierunku urządzenia. Myszom wolno było chwytać gładką metalową trójkątną belkę pociągową tylko przednimi końcami, a następnie pociągnięto do tyłu w płaszczyźnie poziomej. Siła przyłożona do pręta w momencie uwolnienia chwytu została zarejestrowana jako szczytowe napięcie (kg). Test powtórzono 5 razy w tej samej sesji, a najwyższą wartość z 5 prób zarejestrowano jako siłę uchwytu dla tego zwierzęcia. Analiza ekspresji białek. Kręgowe popękowe z męskich myszy WT i AR113Q homogenizowano w buforze RIPA zawierającym koktajl koktajlu proteazy cOmplete (Roche Diagnostics) i 0,1% P-merkaptoetanolu z użyciem homogenizatora silnika (TH115; OMNI International). Próbki lizatów oczyszczono przez odwirowanie przy 15000 g przez 5 minut w 4 ° C. Przeciwciało anty-AR (N-20; Santa Cruz Biotechnology Inc.) skoniugowano z przemytymi perełkami agarozowymi z białkiem A / G (SC-2003; Santa Cruz Biotechnology Inc.)
[przypisy: wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, krem pod oczy z peptydami, narodowy fundusz zdrowia w łodzi ]
[hasła pokrewne: suplementy na wypadanie włosów, zst kolbuszowa, kolbuszowa dolna ]