Patologia zależna od androgenów demonstruje miopatyczny wkład w fenotyp choroby Kennedyego w modelu myszy typu knock-in cd

W przeciwieństwie do tego, nie obserwowano zmian w mięśniu szkieletowym samców WT lub AR48Q (nie pokazano). Figura 2: Patologia mięśniowo-mięśniowa u samców myszy AR113Q. (A) Zgrupowane atroficzne, kątowane włókna (górna lewa strona) i zaznaczone zmiany wielkości włókien i wewnętrzne jądra (górna prawa) są obecne w mięśniach szkieletowych tylnych kończyn u mężczyzn AR113Q. Powiększenie, × 400 (górne lewe); × 1000 (prawy górny róg). Występują także AR (dolny lewy) i ubikwityna (dolny prawy) immunoreaktywny wtręt wewnątrzjądrowy. Powiększenie, × 1000. (B) Względna miogenina, podjednostka a receptora acetylocholinowego (AChRa) i mioMNA mRNA w mięśniach kończyn tylnych określona za pomocą ilościowej RT-PCR w czasie rzeczywistym. Dane pochodzą z WT (n = 8), AR113 (n = 8) i wykastrowanych samców WT (C-WT) (n = 6) po 3. 5 miesiącach i wykastrowanych samców AR113Q po 18 miesiącach (n = 4). Wyniki są podane jako średnie. SD w stosunku do ekspresji rsNA 18s. Poziomy ekspresji miogeniny i mRNA podjednostki a receptora acetylocholiny w mięśniu AR113Q są istotnie różne od tych we wszystkich innych grupach (odpowiednio P <0,01 i P <0,001, według ANOVA z testem wielokrotnego porównania Neumana-Keulsa). Ekspresja mRNA MyoD w mięśniach AR113Q i WT nie różni się znacząco. (C) Względne poziomy ekspresji mRNA AR w mięśniach kończyn tylnych mężczyzn WT (n = 8) i AR113Q (n = 8) po 3. 5 miesiącach (P> 0,05). (D) Ekspresja białka AR w mięśniu szkieletowym (górny panel) i rdzeniu kręgowym (dolny panel) WT (ścieżki i 2) i samce AR113Q (ścieżki 3 i 4) po 3. 4 miesiącach wykryto przez immunoprecypitację i Western blot. (E) Wtrącenia wewnątrzjądrowe w rdzeniu kręgowym i mięśniu szkieletowym myszy AR113Q po 24 miesiącach wykryto za pomocą immunohistochemii dla AR i rozszerzonego układu glutaminowego (1C2). Powiększenie, × 1000. Aby określić, czy zmiany ekspresji genu odzwierciedlające odnerwienie wystąpiły w mięśniu AR113Q, zastosowano ilościową RT-PCR w czasie rzeczywistym do pomiaru poziomów miRNA, podjednostki a receptora acetylocholinowego i mRNA antygenów różnicujących miogenność (MyoD). Te transkrypty są indukowane po odnerwieniu (31. 33), ale nie w mięśniu szkieletowym z modeli mysich lub pacjentach z chorobą Huntingtona (34), innym zaburzeniem ekspansji poliglutaminowej. Mięsień szkieletowy AR113Q wyrażał 8- do 15-krotnie wyższe poziomy mRNA podjednostek a myogeniny i receptora acetylocholiny w porównaniu z mięśniami WT (Figura 2B), podczas gdy ekspresja mRNA MyoD nie ulegała istotnej zmianie. Chirurgiczne kastrowanie samców AR113Q przywracało ekspresję mRNA podjednostek a myogeniny i receptora acetylocholiny w kierunku poziomów WT, wykazując, że te różnice w ekspresji genów są zależne od androgenów. Aby dalej ustalić związek między patologią mięśni szkieletowych i rdzenia kręgowego, oceniano ekspresję AR u młodych i starych WT oraz u mężczyzn z mutacjami. Ilościowy RT-PCR w czasie rzeczywistym wykazał, że poziomy mRNA AR były równoważne w mięśniach szkieletowych tylnych kończyn WT i zmutowanych mężczyznach w ciągu 3-5 miesięcy (Figura 2C). Rozpuszczalne białko wykrywalne przez immunoprecypitację nieznacznie spadło w mięśniach szkieletowych i rdzeniu kręgowym zmutowanych samców (Figura 2D), prawdopodobnie odzwierciedlając tworzenie nierozpuszczalnych kompleksów białkowych przez rozszerzony receptor glutaminy, podobny do tych wcześniej wykrywanych w innych tkankach (27). Pomimo pojawienia się częstych wtrętów wewnątrzjądrowych AR w mięśniu 3 – 5-miesięcznych zmutowanych samców, nie wykryto patologii rdzenia kręgowego u zwierząt w tym wieku (nie pokazano). Neuronalne inkluzji wewnątrzjądrowych wykrywano w rdzeniu kręgowym AR113Q samców tylko w 24 miesiące (Figura 2E), punkt czasowy, w którym mięśnie szkieletowe kończyny tylnej zawierały również częste agregaty wewnątrzjądrowe. Odcinki mózgu, wątroby i nerek od tych starzejących się mężczyzn AR113Q również badano pod kątem wtrętów międzyjądrowych AR, i nie zidentyfikowano żadnych (nie pokazano). Przedwczesna śmierć zależna od androgenów u mężczyzn rasy AR113Q. Analiza długości życia wykazała, że mężczyźni AR113Q zmarli w młodym wieku. Jak pokazano na Fig. 3A, około 80% samców AR113Q zmarło pomiędzy 8 a 20 tygodniem, podczas gdy żaden z samców WT lub heterozygotycznych mutantów (Figura 4E) nie padł w tym samym okresie. Wczesna śmierć była zależna od długości glutaminy, ponieważ przeżyły wszystkie 6 samców AR21Q i 9 AR48Q w wieku do 24 miesięcy (nie pokazano). Trzy linie dowodów potwierdziły, że przedwczesna śmierć była spowodowana rozszerzonym glutaminą AR, a nie innym czynnikiem, takim jak wtórna mutacja generowana podczas celowania w geny. Po pierwsze, fenotyp pozostał niezmieniony, ponieważ myszy krzyżowano wstecznie z C57BL / 6J. Krzywa przeżycia krzyżówek z krzyżem drugiej generacji pokrytych krzyżowo AR113Q (N2 AR113Q) (Figura 3A) nie różniła się istotnie od samców myszy N5 AR113Q (Figura 3B)
[hasła pokrewne: krem pod oczy z peptydami, polskie towarzystwo ultrasonograficzne, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi ]
[hasła pokrewne: niepokój manipulacyjny, wirusowe zapalenie krtani, zdrowe odżywianie dzieci ]