PPAR ligandy hamują wzrost guza pierwotnego i przerzuty przez hamowanie angiogenezy ad 5

Każdy punkt reprezentuje średnią. SD dla trzech odwiertów. Przedstawiono reprezentatywne eksperymenty trzech oddzielnych testów. Różnica w hamowaniu między dniem 3 a dniem 7 jest wynikiem zwiększonej śmierci komórek śródbłonka w dniu 7 w niestymulowanych komórkach w pożywce z niedoborem (komórki w surowicy). (b) Procent proliferacji komórek śródbłonka i nowotworu traktowanych przez 7 dni rozyglitazonem. (c) Poziomy ufosforylowanej postaci eIF-2. białko po leczeniu rozyglitazonem w komórkach HUVEC. Fibroblasty NIH3T3 (3T3) służą jako kontrola pozytywna. (d) Poziomy VEGF (wyrażone jako zmniejszenie procentowe) w komórkach U87 i LLC po 6 dniach leczenia rozyglitazonem. W przeciwieństwie do tego, rozyglitazon nie hamował znacząco proliferacji mięśniaka prążkowanego, glioblastomy, LLC i komórek liposiarczaka po 72-godzinnym okresie inkubacji, nawet w dziesięciokrotnych dawkach (10 .M) stężenia stosowanego do hamowania komórek śródbłonka (Figura 3a). Nawet po 7 dniach leczenia rozyglitazon powodował jedynie maksymalne hamowanie 26% komórek tłuszczaka i prążkowia we wszystkich badanych stężeniach, podczas gdy glejak i LLC były stosunkowo odporne na antyproliferacyjne działanie rozyglitazonu (Figura 3b). Ponieważ TZD aktywują PPAR. i PPAR. receptory większe niż 10 .M (30), użyliśmy stężeń 10 .M i mniej. Uważa się, że działanie hamujące TZD jest niezależne od PPAR-a. i pośredniczone przez hamowanie inicjacji translacji (12). W celu ustalenia, czy wzrost komórek śródbłonka został zahamowany w ten sposób, zbadaliśmy fosforylację czynnika inicjacji translacji eIF-2. w odpowiedzi na rozyglitazon w tym samym zakresie stężeń, co w badaniach proliferacyjnych. Znaleźliśmy eIF-2. był częściowo ufosforylowany, gdy HUVEC traktowano 5 (3M rozyglitazonem i w pełni ufosforylowano 10. M rozyglitazonem (Figura 3c). Jednakże przy stężeniu 0,01 (1,3 M rozyglitazonu, które było skuteczne w hamowaniu wzrostu komórek śródbłonka, nie było wpływu na eIF-2. fosforylowanie (Figura 3c). Te wyniki sugerują, że działanie hamujące wzrost rozyglitazonu na komórki śródbłonka najprawdopodobniej jest spowodowane przez PPARa. aktywacja, a nie zahamowanie inicjacji translacji. Efekty pośrednie. Aby określić, czy rozyglitazon może pośrednio hamować angiogenezę poprzez obniżanie ilości wydzielanych przez nowotwór czynników wzrostu, mierzyliśmy poziomy bFGF i VEGF w podłożach uwarunkowanych nowotworem. Wszystkie linie nowotworowe wykazywały znikome poziomy bFGF, ale dwa nowotwory, glejak i LLC, wykazały istotną produkcję VEGF: odpowiednio 20 000 pg / 106 komórek i 938 pg / 106 komórek. Rozyglitazon przy 10 .M hamował wydzielanie VEGF w komórkach LLC o 56%, a przy .M hamował wydzielanie VEGF w komórkach U87 o 42% (Figura 3d). Hamujące działanie TZD na wydzielanie VEGF przez komórki nowotworowe sugeruje pośredni wpływ na śródbłonek in vivo poprzez produkcję komórek nowotworowych angiogennego mitogenu VEGF. PPAR. ligandy hamują angiogenezę CAM i indukowaną bFGF neowaskularyzację rogówki Aby zbadać zdolność PPARa. Ligandy do hamowania angiogenezy in vivo, badaliśmy wpływ rozyglitazonu na wzrost de novo naczyń krwionośnych na CAM 6-dniowych zarodków kurzych, jak podano (23, 28). Zaletą testu CAM jest to, że zapewnia ono środowisko wolne od makrofagów aż do dnia 8 (31). Po 48-godzinnym leczeniu rozyglitazonem, angiogeneza CAM była hamowana w sposób zależny od dawki: 0,1 .g nie miało wpływu; 1. G powodował nieznaczne działanie hamujące w strefie beznaczyniowej wynoszącej 1. 2 mm; 2,5. G spowodował 3 mm strefę naczyniową wokół krążka (Figura 4b). Rysunek 4PPAR. Ugandy hamują angiogenezę in vivo w neowaskularyzacji rogówki wywołanej przez CAM i bFGF. (a) Zwykły CAM implantowany z dyskiem metylocelulozy. (b) Po 48-godzinnej ekspozycji na rozyglitazon (2,5 .g) wokół krążka zaobserwowano strefy beznaczyniowe wolne od naczyń włosowatych i małych naczyń (strzałki wskazują na strefę beznaczyniową 3 mm). Pasek skali, 22,5 mm. (c) neowaskularyzacja wywołana bFGF w rogówce kontrolnej w dniu 6. (df) Leczenie układowe rozyglitazonem w dawce 50 mg / kg / dzień (d), 100 mg / kg / dzień (e) i 400 mg / kg / d (f). (g) Obszar zahamowania (procent) za pomocą różnych dawek dziennego i dwa razy na dobę podawania rozyglitazonu. Hamowanie określono w dniu 6 za pomocą wzoru 0,2x. × długość neovessela × godziny zegarowe neovessels (n = 6 oczu na grupę, doświadczenie przeprowadzono trzy razy). Linie są dopasowywane do danych przy założeniu rozkładu Gaussa. Aby zoptymalizować antyangiogenne dawki TZD do codziennego podawania myszom, wszczepiliśmy 80 ng peletek bFGF w rogówki myszy, aby stymulować neowaskularyzację rogówki przez 6 dni, jak podano (23, 28, 29) (Figura 4c)
[przypisy: niepokój manipulacyjny, kolbuszowa dolna, przychodnia ożarów mazowiecki ]
[podobne: wirusowe zapalenie krtani, zdrowe odżywianie dzieci, syrop tymiankowy złożony ]