PPAR ligandy hamują wzrost guza pierwotnego i przerzuty przez hamowanie angiogenezy cd

Po 24 godzinach komórki głodzono przez 12 godzin w 0,5% FBS. Komórki traktowano TZD rozpuszczonymi w 0,1% DMSO. Pożywkę zmieniono w dniach 3 i 5. Komórki zliczono z licznikiem cząstek w dniach 3 i 7. Testy z użyciem kurzowo-kosmówkowej błonki (CAM) przeprowadzono w trzech oddzielnych eksperymentach, jak opisano (23). CAM obserwowano 48 godzin po wszczepieniu dysku metylocelulozowego (10 .l) zi bez rozyglitazonu. Testy neowaskularyzacji rogówki przeprowadzono jak opisano (23). Po wszczepieniu 80 ng bFGF, TZD podawano przez 6 dni przez zgłębnik w wodnym roztworze 10% DMSO w 0,5% metylocelulozie, jak opisano (6), a myszy kontrolne otrzymywały nośnik. W badaniach nowotworów LLC wstrzykiwano jak opisano (23). Mięsień prążkowanokomórkowy i komórki glejaka wstrzyknięto podskórnie (2 x 106 komórek w 0,1 ml PBS). Gdy guzy wyniosły 100-200 mm3, myszy losowo przydzielono do grup leczonych i nośników. TZD lub nośnik podawano codziennie przez zgłębnik przez 14. 40 dni. Guzy mierzono co 3-5 dni, a objętość obliczano jako szerokość2 × długość x 0,52. Komórki nowotworu prostaty (LNCaP) wszczepiono ortotopowo, jak opisano (24). Dwadzieścia jeden dni po wszczepieniu myszy z PSA w surowicy pomiędzy 40 a 60 ng / ml losowo przydzielono do grupy leczonej i grupy nośników. TZD lub nośnik podawano przez 17 dni (n = 6 myszy na grupę). W przypadku przerzutów nowotwory LLC zostały usunięte 14 dni po wszczepieniu, jak opisano (23). Po resekcji LLC, myszy leczono TZD lub nośnikiem przez 17 dni, gdy myszy kontrolne stały się śmiertelnie chore. W ostatnim dniu leczenia różnica statystyczna między grupami leczonymi i kontrolnymi została określona za pomocą testu ucznia. Wartość AP mniejsza niż 0,05 została przyjęta jako znacząca. Obrazowanie nowotworów za pomocą komputera. Przekroje histologiczne guzów analizowano pod kątem gęstości naczyń za pomocą komputerowego obrazowania densytometrycznego (Quantimet 570, Leica Inc., Deerfield, Illinois, USA, kamera JVC 3-CCD, Victor Co., Tokio, Japonia). Stopień unaczynienia oceniano ilościowo w całym przekroju guza i wyrażano jako stosunek powierzchni naczynia (CD31) do obszaru guza. Histogramy przedstawiają rozkład wskaźników zestawionych dla pól 124 × 314 mikroskopu przy powiększeniu x 125. Wyniki PPAR. jest wysoce ekspresjonowany w śródbłonku nowotworowym in vivo i proliferuje komórki śródbłonka in vitro Najpierw przeanalizowaliśmy wzór ekspresji PPAR. w śródbłonku skóry normalnej i różnych guzów metodą immunofluorescencyjnego podwójnego barwienia dla PPAR. i vWF, marker śródbłonkowy. PPAR. ulegał ekspresji w komórkach śródbłonka i ścianach zdrowej skóry (Figura 1a), w komórkach nowotworowych i w śródbłonku wszystkich badanych nowotworów, w tym ludzkiej tkanki glejaka (Figura 1b). PPAR. lokalizacja w jądrze została potwierdzona przez barwienie Hoechst. Rysunek 1PPAR. ulega ekspresji w śródbłonku tkanek prawidłowych i nowotworowych. (a) Podwójne barwienie immunofluorescencyjne dla vWF i PPARa. demonstruje PPAR. ekspresja w śródbłonku prawidłowej skóry. Komórki śródbłonka zabarwione vWF pokazano na zielono, a komórki PPARy-dodatnie są czerwone. Jądra PPARy-dodatnie wewnątrz śródbłonka są żółte (strzałki). Krwinki czerwone są ekspresją PPARa-mural komórek. Pasek skali, 20 .m. (b) W tkance ludzkiego glejaka, PPAR. (czerwony) jest wyrażany zarówno w guzie (grot strzałki), jak i komórkach śródbłonka. Kolokalizacja czerwonej i zielonej fluorescencji wskazuje na PPAR. w naczyniach krwionośnych (strzałki). Pasek skali, 20 .m. (c) Analiza Western blot PPAR. ekspresja lizatów komórkowych z izolowanych komórek śródbłonka nowotworu z włókniakomięśniaka T241 (T-EC) oraz z hodowanych komórek nowotworowych, w tym włókniakomięsaka T241 (T241), mięsaka prążkowanokomórkowego (RMS), liposiarczaka (LS), glejaka (U87) i LLC. (d) Analiza Western blot PPAR. ekspresja z izolowanych komórek nowotworowych LLC (LLC) i odpowiednich komórek śródbłonka z guza LLC-GFP (T-EC) i komórek śródbłonka skóry (N-EC). Poziomy P-aktyny wykazują ładowanie białka. (e) Ilościowa ocena sygnałów autoradiograficznych. Wartości reprezentują dowolne jednostki densytometryczne znormalizowane dla sygnałów GAPDH. T-EC, śródbłonek nowotworowy; N-EC, normalny (skóra) śródbłonek. (f) Analiza Western blot PPAR. białko wykazujące wyższą ekspresję w proliferacji niż w spokojnym śródbłonku. Starv., Głód; Prolif., Proliferacja; Confl., Confluent (hamowanie kontaktu). Wykazano, że poziomy GAPDH wykazują równe ładowanie białka w każdej ścieżce. Chociaż przeszukaliśmy 11 linii komórek nowotworowych pod kątem guza ujemnego dla PPARy, wszystkie linie komórek nowotworowych wyrażały PPARa. białko, na różnych poziomach (rysunek 1c). Aby potwierdzić wyrażenie PPAR. w komórkach śródbłonka nowotworu oddzieliliśmy komórki śródbłonka od zawiesiny komórek włókniakomięśniaka T241
[patrz też: przychodnia ożarów mazowiecki, badanie kału na pasożyty, wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie ]
[podobne: kolbuszowa dolna, wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego ]