Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 5

Przetestowaliśmy zatem ludzką laktoferynę, bydlęcą a-kazeinę, ludzki lizozym, ludzką (3-laktoalbuminę i ludzki SLPI, które, jak wykazano, mają działanie modulacyjne na replikację HIV-1 in vitro (44-59). Wszystkie te związki testowano w teście adhezji perełek gp120 i ELISA wiązania DC-SIGN-Fc (Figura 6). Żaden z badanych związków mleka kobiecego nie może hamować wiązania gp120 z Raji-DC-SIGN lub iDCs (Figura 6, A i B, odpowiednio). Ponadto DC-SIGN-Fc nie wykazuje wiązania z wybranymi związkami mlecznymi (Figura 6C). Jako kontrolę użyto laktoferyny bydlęcej, która poprzednio wiązała DC-SIGN i zapobiegała przenoszeniu wirusa (58). Ryc. 6 Główne białka mleka nie są odpowiedzialne za hamujący wpływ ludzkiego mleka. (A i B) komórki Raji-DC-SIGN lub iDC inkubowano z głównymi białkami mleka przed dodaniem fluorescencyjnych perełek powleczonych gp1203; kontrolne komórki inkubowano z buforem. W celu określenia specyficzności obserwowanego wiązania, komórki inkubowano z AZN-D1, EGTA i mannanem przed dodaniem perełek gp120. Gwiazdki oznaczają P <0,01 w porównaniu z kontrolą niehamującą. (C) Główne białka mleka powleczono na płytkach ELISA i zmierzono wiązanie DC-SIGN-Fc. W celu określenia specyficzności obserwowanego wiązania, DC-SIGN-Fc preinkubowano z AZN-D1 i EGTA. * P <0,01 w porównaniu z kontrolą AZN-D1 i EGTA. We wszystkich doświadczeniach główne białka rozcieńczono do rozcieńczenia 1:20 ich fizjologicznego stężenia w ludzkim mleku. Preinkubacja ludzkiego mleka z anty-LeX Ab podniosła hamowanie transferu HIV-1. Ponieważ DC-SIGN może wiązać cukry, postawiliśmy hipotezę, że jeden z obfitych cukrowych motywów w ludzkim mleku może zapewnić aktywność hamującą (50. 52). Fakt, że wykazaliśmy, że wiązanie gp120 z L-SIGN nie może być zahamowane przez ludzkie mleko (Figura 4D) i wiadomo, że L-SIGN nie wiąże się z motywami LeX, przewidywaliśmy, że LeX może przyczyniać się do obserwowanego hamowania. Aby przetestować naszą hipotezę, wstępnie inkubowaliśmy ludzkie mleko z kontrolą izotypową anty-LeX IgM Ab lub IgM przed użyciem w teście transferu kultury. Wyniki wykazały zależne od dawki zniesienie hamujących wpływów ludzkiego mleka na transfer wirusowy po wstępnej inkubacji z Ab-specyficznym względem LeX, ale nie z kontrolnym Ab (Figura 7A). W przeciwieństwie do tego, test adhezji perełek gp120 nie wykazywał zmniejszonego wiązania DC-SIGN z LeX Ab (dane nie pokazane). Najbardziej prawdopodobne wyjaśnienie tej różnicy polega na tym, że ableksja specyficzna względem LeX o niskim powinowactwie nie była w stanie zablokować interakcji o wysokiej zachłanności komórkowej multimerycznej DC-SIGN z nieznanym ludzkim składnikiem mleka. Test ELISA wiązania DC-SIGN-Fc (Figura 7B) wykazał redukcję wiązania DC-SIGN-Fc po wstępnej inkubacji powleczonego ludzkiego mleka z Ab według LeX, ale znowu nie z kontrolą Ab. Wyniki te wskazują, że LeX ma kluczowe znaczenie dla ludzkiego mleka, który wiąże się z cząsteczką DC-SIGN. Rycina 7 Pobudzenie ludzkiego mleka (1:20) za pomocą LeX IgM Ab uwalnia hamujące właściwości ludzkiego mleka od transferu limfocytów T HIV-1 do limfocytów T za pośrednictwem DC-SIGN. (A) Rozcieńczone ludzkie mleko w stosunku 1: 200 inkubowano osobno, z kontrolą IgM Ab (4 000 ng / ml) lub seryjnymi rozcieńczeniami LeX IgM Ab (4 000 do 32,7 ng / ml) przed dodaniem Raji-DC-SIGN komórki. Dodano LAI i po krótkiej inkubacji komórki przemyto i dodano aktywowane limfocyty T CD4 +, z wartościami CA-p24 określonymi w dniu 7. * P <0,05 w porównaniu z kontrolą Raji-DC-SIGN. (B) Ludzkie mleko (1: 200) pokryto i inkubowano wstępnie z Ab-anty-LeX IgM Ab (4 000 ng / ml) lub IgM kontrolnym IgM (4000 ng / ml) przed dodaniem DC-SIGN-Fc w celu określenia wiązania. DC-SIGN-Fc preinkubowano z AZN-D1 i EGTA w celu określenia specyficzności obserwowanego wiązania. ** P <0,01 w porównaniu z wiązaniem ludzkiego mleka bez obecności Ab. Nie wszystkie kompleksy zawierające LeX mogą hamować HIV-1 oddziałujący z receptorem DC-SIGN. Testowaliśmy kilka związków zawierających jeden lub więcej epitopów LeX dla aktywności wiązania i wiązania DC-SIGN. W teście hodowli przeniesienia, LeX sprzężony z biotynylowanym poliakryloamidem (PAA-LeX) i LeX-BSA były zarówno zdolne do hamowania transferu HIV-1 za pośrednictwem DC-SIGN . (Figura 8A). Wręcz przeciwnie, zarówno LNFP III, oligosacharyd zawierający LeX obecny w ludzkim mleku, jak i sam trisacharyd LeX nie były w stanie zapobiec przeniesieniu HIV-1 (Figura 8A), nawet jeśli wcześniej wykazano, że LNFP III wiąże DC-SIGN ( 59). Związki testowano również w teście adhezji perełek gp120, ale żaden z badanych związków nie był w stanie blokować oddziaływania między DC-SIGN i gp120 (dane nie przedstawione) [więcej w: przychodnia ożarów mazowiecki, redukcja tkanki tłuszczowej dieta, syrop tymiankowy złożony ] [podobne: wirusowe zapalenie krtani, zdrowe odżywianie dzieci, syrop tymiankowy złożony ]