Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad 6

Najprawdopodobniej PAA-LeX i LeX-BSA są zdolne do blokowania trimerycznego oddziaływania gp120, podczas gdy wiązanie DC-SIGN do monomerycznego gp120 eksprymowanego na fluorescencyjnych perełkach jest nadal możliwe. Z powodu niemożności powlekania sacharydów na płytkach w teście ELISA wiązania DC-SIGN-Fc, testowaliśmy tylko LeX-BSA i kontrolę BSA. LeX-BSA rzeczywiście wykazuje wiązanie z DC-SIGN-Fc, podczas gdy BSA nie wykazuje wiązania, co wskazuje, że wiązanie DC-SIGN-Fc jest specyficzne dla LeX (Figura 8B). Figura 8Multimeryczny i związany z białkiem lek LeX hamuje transfer wirusowy za pośrednictwem DC-SIGN. (A) Kilka związków zawierających LeX wykazało różnicę w ich zdolności do blokowania zależnego od DC-SIGN. Transferu limfocytów T HIV-1 do CD4 +. Trisacharyd LeX, LNFP III, PAA-LeX, LeX-BSA i BSA kontrolne testowano w teście transferu kultury Raji-DC-SIGN w stężeniach 10 .g / ml. Hamowanie jest przedstawione jako procent Raji-DC-SIGN inkubowanego z PBS. (B) LeX-BSA i BSA jako kontrola były powlekane przed dodaniem DC-SIGN-Fc w celu określenia wiązania. DC-SIGN-Fc preinkubowano z AZN-D1 i EGTA w celu określenia specyficzności obserwowanego wiązania. * P <0,01 w porównaniu z kontrolą AZN-D1 i EGTA. Dyskusja Postulowano, że lektyny typu C, takie jak cząsteczka DC-SIGN, wyrażane na DC, odgrywają ważną rolę w przenoszeniu HIV-1 i ustaleniu początkowej infekcji HIV-1 (1, 2, 4, 6, 22. 25). Oddziaływanie DC-SIGN z antygenem powierzchniowym gp120 HIV-1 może skutkować skuteczną prezentacją wirusa w komórkach docelowych i może znacznie zwiększyć infekcję i replikację wirusa (4, 6, 22. 25). Mechanizm ten prawdopodobnie będzie odgrywał rolę w MTCT HIV-1 poprzez karmienie piersią, ponieważ przeniesienie wirusa jest wymagane przez barierę śluzówkową. Obecny w mleku ludzkim wirus spotka się prawdopodobnie z DC znajdującymi się w wysokich stężeniach w obrębie migdałków, przełykiem (41, 42) i jelitami (43), które pomogą w ten sposób uchwycić wirusy, a następnie przenieść je do limfocytów CD4 + w miejscu infekcji lub w zlokalizowane węzły chłonne. W tym badaniu wykazano, że ludzkie mleko ma silny wpływ hamujący na transfer limfocytów T HIV-1 do CD4 + za pośrednictwem DC-SIGN ., przy czym wirusy R5 i X4 są hamowane w tym samym stopniu. Składnik w ludzkim mleku oddziałuje z cząsteczką DC-SIGN, która zapobiega wiązaniu się HIV-1 z receptorem. Wykazaliśmy, że laktoferyna, (3-laktoalbumina, lizozym, a-kazeina i SLPI nie są odpowiedzialne za zaobserwowane zahamowanie interakcji HIV-1 z DC-SIGN, nawet jeśli białka te mogą zmienić bezpośrednie zakażenie limfocytów T CD4 + in vitro ( 44-59). Nasze wyniki pokazujące, że multimeryczne i związane z białkami motywy LeX mogą naśladować hamującą aktywność ludzkiego mleka i że aktywność można złagodzić za pomocą mAb rozpoznającego epitop LeX sugeruje, że składnik LeX w ludzkim mleku zapewnia hamowanie. W większości naszych eksperymentów wykorzystaliśmy linię komórkową wyrażającą DC-SIGN . (Raji-DC-SIGN) i kontrolną komórkę Raji pozbawioną DC-SIGN w celu zademonstrowania swoistości DC-SIGN naszych wyników (8). Pokazaliśmy również, że ludzkie mleko hamuje transfer HIV-1 zarówno przez iDCs, jak i mDC, co ilustruje biologiczne znaczenie tego zjawiska, ponownie z inhibicją wynikającą z zapobiegania wiązaniu zamiast downmodulacji DC-SIGN. Poziom ekspresji DC-SIGN okazał się wcześniej wyższy na iDC niż mDC (60); jednak ludzkie mleko hamowało transfer wirusowy przez oba typy komórek. Wynik ten wskazuje, że obserwowane hamowanie transferu zależnego od mDC może odzwierciedlać zdolność ludzkiego mleka do blokowania przenoszenia HIV-1 przez inne lektyny typu C, takie jak receptor mannozowy lub niezidentyfikowany receptor oporny na trypsynę (61). Czy nadal pozostaje określenie tego samego związku (ów) zawierającego LX lub tego, czy inne motywy cukrowe w ludzkim mleku mogą wiązać się z innymi receptorami lektyny typu C. Wykazaliśmy jednak, że wiązanie się HIV-1 z homologem L-SIGN z DC-SIGN nie jest hamowane przez ludzkie mleko. Nasz wynik odpowiada poprzedniej obserwacji, że Lex obecny w antygenach jaj Schistosoma mansoni (54) jest w stanie oddziaływać z DC-SIGN, ale nie z L-SIGN (62), potwierdzając LeX jako kandydata do obserwowanego hamowania DC-SIGN. pośredniczy transfer HIV-1. PAA-LeX i LeX-BSA skutecznie hamowały przenoszenie HIV-1 za pośrednictwem DC-SIGN .. Odwrotnie, zarówno monomeryczny trisacharyd LX jak i LNFP III, ludzki cukier mleczny, nie hamują przenoszenia wirusa. Chociaż wykazano, że LNFP III wiąże się wcześniej z DC-SIGN (59), to oddziaływanie nie prowadzi do wystarczającego zablokowania interakcji HIV-1 z DC-SIGN, ani też nie zapobiega przeniesieniu wirusa do limfocytów T CD4 + [hasła pokrewne: wirusowe zapalenie krtani, kolbuszowa dolna, zst kolbuszowa ] [więcej w: narodowy fundusz zdrowia w łodzi, przychodnia ożarów mazowiecki, badanie kału na pasożyty ]