Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + ad

Wiele epitopów cukrowych występujących w ludzkim mleku składa się z grupy antygenów Lewisa, w tym Lewisa X (LeX) i Lewisa Y (LeY) (53), które mogą stanowić część większego oligosacharydu, niezależnie od tego, czy cukier jest związane z białkiem lub nie. Epitop LeX (GalA 1-4 [Fuc. 1-3] GlcNAc-R) jest również zawarty w reszcie cukrowej LNFP III. Ten sam epitop cukrowy został zidentyfikowany w płynach ustrojowych, w tym ślinie, krwi i ludzkim mleku, a także wykazano, że jest obecny w wielu patogenach (21) i ekstraktach z patogenów (54). Wykazano, że niektóre z ludzkich oligosacharydów chronią przed toksynami i patogenami związanymi z chorobami wieku dziecięcego (55). Wyniki Wpływ mleka ludzkiego na bezpośrednie zakażenie HIV-1 limfocytów T CD4 + i transfer HIV-1 za pośrednictwem DC-SIGN. Zbadaliśmy wpływ mleka ludzkiego na bezpośrednią infekcję limfocytów T CD4 + przez inkubację wirusa HIV-1 w obecności kilku rozcieńczeń ludzkiego mleka od dawcy ujemnego względem HIV-1 (3 po 6 miesiącach w okresie laktacji. Dwukrotne rozcieńczenie ludzkiego mleka wykazało znaczący stopień hamowania wirusa (> 90%; P <0,05) w porównaniu z kontrolą PBS (rysunek 1A), co odpowiada wcześniejszym doniesieniom (44. 49). Wskazujemy również na wzmocnienie infekcji przy rozcieńczeniu 1:10 podobnym do wyników z poprzedniego badania (38). Preinkubacja tej samej próbki mleka ludzkiego (1: 2) z HIV-1 przed dodaniem do limfocytów T CD4 + (Figura 1B) nie wykazała działania hamującego w porównaniu z kontrolą PBS, co wskazuje, że hamowanie przedstawione na Figurze 1A nie jest spowodowane bezpośredni wirusobójczy efekt mleka i że efekt prawdopodobnie zostanie nadany limfocytowi CD4 +. Doświadczenia powtórzono z mlekiem ludzkim od 2 innych matek, uzyskując równoważne wyniki (dane nie przedstawione). Figura Bezpośrednia infekcja limfocytów T CD4 + w obecności ludzkiego mleka. (A) PBS lub kilka rozcieńczeń ludzkiego mleka od niezakażonej matki dodano do LAI (X4) i dodano do limfocytów T wzbogaconych w CD4. Po 2-godzinnej inkubacji limfocyty T CD4 + przemyto i dodano świeżą pożywkę. (B) LAI (X4) inkubowano z rozcieńczeniem 1: 2 ludzkiego mleka lub PBS przez 2 godziny, po czym wykonano kilka rozcieńczeń i dodano do limfocytów T CD4 +. W obu eksperymentach oznaczono stężenie CA-p24 w dniu 7. * P <0,05 w porównaniu z kontrolą PBS. Komórki wyrażające DC-SIGNa mogą zwiększać infekcję limfocytów T CD4 + (4, 8). Aby zbadać wpływ ludzkiego mleka na transfer HIV-1 za pośrednictwem DC-SIGN ., wykorzystaliśmy linię komórkową Raji wyrażającą receptor DC-SIGN (Raji-DC-SIGN) (8). Tę samą próbkę mleka ludzkiego, jaką zastosowano w teście bezpośredniej infekcji lub PBS wzbogaconym w pierwotne izolaty HIV-1 inkubowano z komórkami Raji-DC-SIGN przez 30 minut lub 2 godziny, po czym komórki przemyto i inkubowano z aktywowanym CD4 + T limfocyty i hodowlę monitorowano pod kątem replikacji wirusa. Komórki Raji-DC-SIGN preinkubowane z PBS wzbogaconym w HIV-1 wykazały skuteczne przeniesienie do limfocytów T CD4 + (Figura 2A, czarna linia). Linia komórkowa Raji nie wyrażająca DC-SIGN nie wykazywała transferu wirusowego, co pokazuje, że obserwowany efekt jest zależny od DC-SIGN (dane nie pokazane). Niespodziewanie, preinkubacja komórek Raji-DC-SIGN z ludzkim mlekiem wzbogaconym w HIV-1. Znacznie zmniejszała lub blokowała transfer HIV-1 w zależności od czasu inkubacji (Figura 2A, szara linia). Poprzez test żywotności komórek, wykazaliśmy, że obserwowane hamowanie nie było spowodowane indukowaną śmiercią komórkową Raji-DC-SIGN przez ludzkie mleko (dane nie pokazane). Eksperyment przeniesienia ujawnił, że ludzkie mleko blokuje transfer HIV-1 przez komórki Raji-DC-SIGN, niezależnie od wirusowego fenotypu koreceptora. Następnie przeprowadziliśmy graniczne rozcieńczenia tej samej próbki mleka ludzkiego i stwierdziliśmy, że warianty HIV-1 R5 i X4 były całkowicie zahamowane przy rozcieńczeniu 1: 128, ale nie przy rozcieńczeniu 1: 512 (Figura 2B). Podobne wyniki zaobserwowano w tych samych testach z użyciem ludzkiego mleka od 2 innych dawców ujemnych pod względem HIV-1 (dane nie przedstawione). Figura 2 Transfer zależny od DC-SIGN. Limfocytów T HIV-1 do CD4 + jest hamowany w obecności ludzkiego mleka. (A) Rozcieńczenie 1: 2 ludzkiego mleka niezakażonej matki lub PBS wzbogacono pierwotnymi izolatami NSI-18 (R5) lub SI-19 (X4) przed dodaniem do komórek Raji-DC-SIGN. Po inkubacji trwającej 30 minut lub 2 godziny komórki przemyto i aktywowano limfocyty T CD4 +. Replikację wirusa mierzono w dniach 7, 9, 12 i 14 po infekcji, określając wartości CA-p24 przy użyciu standardowego testu ELISA. Paski przedstawiają maksymalne i minimalne wartości CA-p24. (B) PBS lub seryjne rozcieńczenia ludzkiego mleka zaszczepiono JR-CSF (R5) lub LAI (X4) przed dodaniem komórek Raji-DC-SIGN; po inkubacji trwającej 2 godziny komórki płukano PBS i dodawano stymulowane limfocyty T CD4 + [patrz też: zdrowe odżywianie dzieci, syrop tymiankowy złożony, kalendarz triathlon 2015 ] [przypisy: mleko z biedronki wycofane, suplementy na wypadanie włosów, zst kolbuszowa ]