Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + cd

W dniu 7 stężenia CA-p24 określono standardowym testem ELISA. Procentowe hamowanie określono w odniesieniu do stężenia CA-p24 odpowiedniego wzbogaconego kontrolnego PBS. Ludzki związek (e) mleka wiąże się z DC-SIGN, zapobiegając w ten sposób przeniesieniu HIV-1 do limfocytów T CD4 +. Aby ustalić, czy hamujący wpływ ludzkiego mleka na transfer wirusowy, w którym pośredniczy Raji-DC-SIGN, był spowodowany interakcją mleka ludzkiego z HIV-1 lub DC-SIGN, przeprowadziliśmy eksperymenty z inkubacją wstępną zarówno komórek Raji-DC-SIGN, jak i HIV. z ludzkim mlekiem. Aby przetestować wiązanie czynnika hamującego z komórkami Raji-DC-SIGN, preinkubowaliśmy komórki o znanym stężeniu hamującym ludzkie mleko (1: 4) lub PBS przed płukaniem, a następnie dodając wirusa, a następnie limfocyty T CD4 +. Alternatywnie, w celu zbadania wiązania składników ludzkiego mleka z wirusem, inkubowaliśmy materiał wyjściowy wirusa o wysokim mianie z PBS lub ludzkim mlekiem, po czym dodano komórki Raji-DC-SIGN, rozcieńczając w ten sposób mleko do stężenia niehamującego ( 1: 667); Następnie dodano limfocyty T CD4 +. Preinkubacja wirusa z ludzkim mlekiem wykazała niewielką redukcję przeniesienia wirusa w porównaniu z kontrolą PBS (Figura 3A), prawdopodobnie odzwierciedlając resztkowe działanie hamujące ludzkiego mleka. Przeciwnie, preinkubacja komórek Raji-DC-SIGN z ludzkim mlekiem zapewniała bardzo znaczące zmniejszenie transferu wirusa w porównaniu z kontrolą PBS (P <0,01, Figura 3B). W celu sprawdzenia, czy zaobserwowane hamowanie było spowodowane obniżoną modulacją ekspresji DC-SIGN, zbadaliśmy ekspresję powierzchniową DC-SIGN w obecności ludzkiego mleka. Wykazaliśmy, że przy 2 mAb specyficznych dla DC-SIGN ., AZN-D2 i przeciwciarzu 4, ekspresja powierzchni komórkowej nie uległa zmianie, podczas gdy wiązanie AZN-D1 było zmniejszone, gdy komórki DC-SIGN były wstępnie inkubowane z ludzkim mlekiem (Figura 3C). ). Wyniki te sugerują, że efekt hamujący zachodzi poprzez wiązanie czynnika (ów) w ludzkim mleku z cząsteczką DC-SIGN i zapobieganie jej interakcji z HIV-1 w przeciwieństwie do downmodulacji cząsteczki DC-SIGN na powierzchni komórki . Figura 3 Związek (-y) ludzkiego mleka wchodzi w interakcje z receptorem DC-SIGN, co nie prowadzi do downmodulacji DC-SIGN. (A) Ludzkie mleko (1: 4) lub PBS preinkubowano wstępnie surowicą LAI o wysokim mianie przed dodaniem do komórek Raji-DC-SIGN w rozcieńczeniu, o którym wiadomo, że nie hamuje replikacji wirusa. Po inkubacji komórki płukano i dodawano limfocyty T CD4 +, z wartościami CA-p24 mierzonymi w dniu 15 standardowym testem ELISA (P> 0,01). (B) Ludzkie mleko (1: 4) lub PBS inkubowano z Raji-DC-SIGN, po czym komórki przemywano w celu usunięcia niezwiązanych składników ludzkiego mleka przed dodaniem LAI. Po inkubacji komórki ponownie przemyto i dodano limfocyty T CD4 +, z wartościami CA-p24 zmierzonymi w dniu 15 standardowym testem ELISA. * P <0,01. (C) Komórki Raji-DC-SIGN inkubowano z TSM lub ludzkim mlekiem (1: 2) przed oznaczeniem wiązania specyficznych Abs AZN-D1, AZN-D2 i anty-łodygi 4 DC-SIGN. Wypełnione histogramy przedstawiają kontrolę izotypową; czarne linie oznaczają wiązanie Ab bez preinkubacji ludzkiego mleka; a przerywane linie oznaczają wiązanie Ab po inkubacji komórek z ludzkim mlekiem. Aby pokazać bezpośrednie wiązanie ludzkiego związku (ów) mleka z DC-SIGN, wprowadziliśmy 2 wcześniej opisane testy (6, 56), test adhezji perełek gp120 i ELISA wiązania DC-SIGN-Fc. W teście adhezji perełek gp120 badano wpływ ludzkiego mleka na wiązanie pereł fluorescencyjnych powlekanych gp120 do komórkowej DC-SIGN. Wiązanie perełek gp120 zarówno z Raji-DC-SIGN, jak i niedojrzałymi DC (iDC) było hamowane przez ludzkie mleko w porównaniu z kontrolą (P <0,01, odpowiednio, Figura 4, A i B). W celu wykazania specyficznego wiązania DC-SIGN ., komórki wstępnie inkubowano z Ab-specyficznym DC-SIGNp (AZN-D1), cukrem mannanowym wiążącym DC-SIGN . i chelatorem Ca2 +, EGTA. Stwierdzono, że środki te blokują wiązanie perełek gp120 z komórkami wyrażającymi DC-SIGN . w takim samym zakresie jak ludzkie mleko (Figura 4, A i B). Aby potwierdzić bezpośrednią interakcję DC-SIGN z ludzkim mlekiem, przeprowadziliśmy ELISA wiązania DC-SIGN-Fc, gdzie wykazaliśmy, że wiązanie DC-SIGN-Fc z ludzkim mlekiem było specyficzne, ponieważ preinkubacja DC-SIGN-Fc z AZN- D1 lub EGTA całkowicie zniosły wiązanie (P <0,01, Figura 4C). Figura 4 Test ELISA wiązania DC-SIGN-Fc i test adhezji perełek gp120 przedstawiają interakcję związku (-ów) ludzkiego mleka z DC-SIGN. (A i B) komórki Raji-DC-SIGN lub iDCs inkubowano odpowiednio z ludzkim mlekiem (1:20) przed dodaniem fluorescencyjnych perełek powlekanych gp120 . [hasła pokrewne: suplementy na wypadanie włosów, badanie kału na pasożyty, sok z buraka właściwości ] [podobne: kolbuszowa dolna, wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego ]