Składnik Lewisa X w ludzkim mleku wiąże DC-SIGN i hamuje transfer HIV-1 do limfocytów T CD4 + czesc 4

Komórki DC-SIGN-dodatnie i pozorowane komórki Raji inkubowano z buforem jako kontrolą. W celu określenia specyficzności obserwowanego wiązania, komórki inkubowano z AZN-D1, EGTA i mannanem przed dodaniem perełek gp120. * P <0,05 w porównaniu ze sterowaniem PBS. (C) Ludzkie mleko (1:20) pokryto przed dodaniem DC-SIGN-Fc. Specyficzność obserwowanego wiązania określono przez preinkubację DC-SIGN-Fc z AZN-D1 i EGTA. ** P <0,01 w porównaniu z kontrolą niehamującą. (D) Komórki Raji wyrażające receptor L-SIGN inkubowano z buforem, ludzkim mlekiem (1:20), AZN-D1, AZN-D2 lub mannanem przed dodaniem fluorescencyjnych perełek gp120. P <0,01 w porównaniu z wiązaniem bez inhibitora. Specyficzny dla wątroby i węzła limfatycznego homolog DC-SIGN (specyficzna dla wątroby i chłonna nie-integryna wchłaniająca ICAM3 [L-SIGN]) może również wchodzić w interakcję z HIV-1 i zwiększać infekcyjność wirusa (57). Aby zbadać wpływ mleka ludzkiego na interakcję L-SIGN i gp120, inkubowaliśmy komórki Raji wyrażające cząsteczkę L-SIGN (Raji-L-SIGN) z ludzkim mlekiem w teście adhezji perełek gp120, a jako kontrolę, komórki preinkubowano z AZN-D1, AZN-D2 (abecyficzny L-SIGNp), mannanem i EGTA. Wyniki wykazały, że ludzkie mleko nie hamuje interakcji gp120 z L-SIGN (Figura 4D), co wskazuje na specyficzność ludzkiego mleka jako związku dla DC-SIGN. Ludzkie mleko hamuje zarówno zależny od DC jak i DC transfer wirusa HIV-1. Aby zbadać biologiczne znaczenie hamujących właściwości ludzkiego mleka, wykorzystaliśmy opisany powyżej jednokrotny test transmisji HIV-1 (58) z użyciem zarówno iDC jak i dojrzałych DC (mDC). Albo iDCs lub mDCs [dojrzałe przez poliD (IC)] inkubowano z kilkoma rozcieńczeniami ludzkiego mleka przed dodaniem LAI (X4) HIVI i komórek docelowych. Po 24 godzinach mierzono aktywność lucyferazy, co stanowi transmisję HIV-1 do komórek LuSIV. Stwierdzono, że ludzkie mleko hamuje transfer zależny od HIV-1. zarówno przez iDC jak i mDC (Figura 5A) w sposób zależny od dawki, przy 2- i 5-krotnym rozcieńczeniu wykazującym znaczące hamowanie dla obu typów komórek (P <0,01). Mycie po wstępnej inkubacji mDC z ludzkim mlekiem (1: 2) przed dodaniem HIV-1 również wykazało znaczące zmniejszenie (P <0,01) przeniesienia HIV-1 w porównaniu z kontrolą PBS (dane nie przedstawione), co wskazuje, że obserwowane hamowanie pokazane na Figurze 5A nie było spowodowane bezpośrednim wirusobójczym działaniem ludzkiego mleka. Wykazaliśmy również, że rozcieńczenie 1: 2 i 1: 5 ludzkiego mleka znacząco zmniejsza przechwytywanie HIV-1 przez iDC (P <0,01, Figura 5B). Przetestowaliśmy także na downmodulację DC-SIGN przez barwienie powierzchni komórki różnymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko DC-SIGN (AZN-D1, AZN-D2 i przeciwciało 4) w obecności lub nieobecności ludzkiego mleka. Zarówno AZN-D2, jak i przeciw-stalk 4 nie wykazały znaczącej różnicy w wiązaniu przed i po ekspozycji na ludzkie mleko, co wskazuje, że receptor DC-SIGN nie jest obniżany w wyniku interakcji z mlekiem ludzkim (Figura 5C), podczas gdy AZN-D1 wykazuje zmniejszone wiązanie po ekspozycji na ludzkie mleko. Oczekujemy, że podobne wyniki można uzyskać z wirusem R5 i komórką wyrażającą CCR5, ponieważ wykazaliśmy, że wirusy R5 i X4 są jednakowo zahamowane przez ludzkie mleko (Figura 2). Rysunek 5 Ludzkie mleko hamuje transfer HIV-1 przez iDC i mDC. (A) Zarówno iDC jak i mDC z tego samego dawcy inkubowano z kilkoma rozcieńczeniami ludzkiego mleka przez 30 minut przed dodaniem LAI (X4). Po 2 godzinach komórki przemyto i dodano komórki LuSIV; po 24 godzinach komórki LuSIV przemyto, a aktywność lucyferazy oznaczono jak opisano w Methods. Gwiazdki reprezentują statystyczne różnice w infekcjach (P <0,05). (B) Po inkubacji iDC z ludzkim mlekiem lub PBS, komórki przemyto i dodano LAI. Po inkubacji przez 2 godziny komórki ponownie przemyto i wychwycono poziomy CA-p24 monitorowano za pomocą testu ELISA. ** P <0,05 w porównaniu z odpowiednią wartością kontrolną dla obu eksperymentów. (C) iDC inkubowano z TSM lub ludzkim mlekiem (1: 2) przed oznaczeniem wiązania specyficznych Abs AZN-D1, AZN-D2 i anty-szkielet 4 DC-SIGN. Wypełnione histogramy przedstawiają kontrolę izotypową; czarne linie oznaczają wiązanie Ab bez preinkubacji ludzkiego mleka; a przerywane linie oznaczają wiązanie Ab po inkubacji komórek z ludzkim mlekiem. Główne ludzkie białka mleka nie wiążą DC-SIGN ani nie hamują transferu HIV-1 do limfocytów T CD4 +. Ponieważ hamowanie przez ludzkie mleko jest obecne w stosunkowo wysokich rozcieńczeniach (Figura 2B), postawiliśmy hipotezę, że jedno z głównych białek obecnych w ludzkim mleku może być odpowiedzialne za aktywność [hasła pokrewne: polskie towarzystwo ultrasonograficzne, kolbuszowa dolna, mleko z biedronki wycofane ] [więcej w: zss kolbuszowa dolna, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi, niepokój manipulacyjny ]