Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 6

Oprócz pośredniczenia w transporcie wstecznego cholesterolu, HDL inicjuje przekazywanie sygnałów w różnych typach komórek istotnych dla aterogenezy (11. 14). W niniejszym badaniu zbadaliśmy proksymalne zdarzenia w sygnalizacji HDL do eNOS i wykazaliśmy, że indukowany przez HDL wypływ cholesterolu i wiele domen SR-BI w wyjątkowy sposób pośredniczy w transdukcji sygnału. Ponieważ dożylne podanie odtworzonego HDL przywraca funkcję śródbłonka w tętnicy ramiennej pacjentów z hipercholesterolemią (33), a dożylna HDL stymuluje perfuzję mięśnia sercowego in vivo u myszy typu dzikiego, ale nie pozbawionych eNOS (34), zdarzenia inicjujące w sygnalizacji HDL do eNOS, które teraz wyjaśniliśmy, skutkują poprawą funkcji śródbłonka i zwiększeniem przepływu krwi wieńcowej. Postulujemy, że mechanizmy te mogą leżeć u podstaw zmniejszenia ryzyka chorób sercowo-naczyniowych zapewnianego przez HDL. Rola w inicjacji sygnału dobrze opisanej zdolności HDL do regulowania strumienia cholesterolu była badana za pomocą wielu strategii. CD indukowała aktywację eNOS, a tej odpowiedzi zapobiegano obciążeniu cholesterolem cyklodekstryny. Dodatek PC do natywnego HDL, który zwiększa wypływ do lipoproteiny (16), dał lepszą odpowiedź. Dodatkowo, przekazywanie sygnału przez natywny HDL zostało zniesione przez neutralizujące przeciwciało SR-BI, które zapobiega wypływowi cholesterolu z udziałem SR-BI (19). Te 3 obserwacje dostarczają mocnych dowodów na rolę wypływu w aktywacji eNOS przez HDL. Ponadto, cząsteczki Lp2A-I pozbawione cholesterolu powodowały aktywację eNOS, podczas gdy Lp2A-I zawierająca cholesterol nie. Odkrycia te wskazują również, że niewielkie składniki HDL, mianowicie estrogen i 1-fosforan sfingozyny (S1P), które wcześniej były zaangażowane w aktywację eNOS (35, 36), najprawdopodobniej są w minimalnym stopniu zaangażowane w tę ścieżkę. Wniosek ten jest zgodny z obserwacjami, że HDL aktywuje eNOS w komórkach pozbawionych receptorów estrogenowych (14) i stymuluje perfuzję mięśnia sercowego u myszy z niedoborem receptora S1P S1P3 (34). Potwierdzenie znaczenia wypływu cholesterolu otrzymano w badaniach SR-BI typu dzikiego w porównaniu do mutanta AVI (22), w którym zdolność AVI do pośredniczenia w wypływach do HDL, ale nie do SUV-ów, była równoległa eNOS w odpowiedzi na HDL, ale nie na SUV. Po ustaleniu znaczenia wypływu cholesterolu, następnie porównaliśmy inicjację sygnału przez SR-BI i CD36. Poprzednie badania wskazywały, że SR-BI pośredniczy w aktywacji eNOS przez HDL (13). W przeciwieństwie do SR-BI, CD36, który ma podobne powinowactwo wiązania do HDL, ale wywołuje obniżony wypływ cholesterolu do HDL (około 25%) (32), nie stymuluje eNOS. Co ciekawe, SR-BI był również wymagany do sygnalizacji w odpowiedzi na CD. Wyniki te sugerują, że oprócz wiązania HDL, SR-BI wyczuwa zmiany w środowisku cholesterolu w błonie plazmatycznej, co prowadzi do inicjacji sygnałów w dół. W poprzedniej pracy przeciwciało SR-BI skierowane przeciwko C-końcowej domenie cytoplazmatycznej receptora hamowało aktywację eNOS za pośrednictwem HDL w izolowanych błonach plazmatycznych (13). Aby dokładniej zbadać rolę końca C SR-BI, porównaliśmy inicjację sygnału przez SR-BI i przez wariant splicingowy SR-BII, który ma alternatywny koniec C kodowany przez egzon w dół (23). W przeciwieństwie do SR-BI, SR-BII nie był zdolny do pośredniczenia w aktywacji eNOS. Ostatnio wykazano, że domena PDZ zawierająca białko PDZK1 oddziałuje z C-końcem SR-BI i odgrywa rolę w ekspresji powierzchni komórkowej SR-BI w hepatocytach i w selektywnym wychwycie lipidów za pośrednictwem SR-BI3 (24, 37, 38). . PDZK1 jest białkiem o 70 kDa zawierającym 4 domeny PDZ bez innych widocznych interakcji lub enzymatycznych motywów białkowych, i jest wyrażany przede wszystkim w nerkach, wątrobie i płucach (37, 39). Ze względu na obecność 4 domen PDZ, PDZK1 może działać jako rusztowanie dla kompleksu wielkocząsteczkowego na błonie plazmatycznej. W ostatnich badaniach domenę interferującą z SR-BI PDZK1 wyznaczono jako ostatnie od 3 do 4 C-terminalnych aminokwasów SR-BI (EAKL), która definiuje typową interakcję domeny PDZ klasy II (24). Ponadto, SR-BI usunięty z ostatniej C-końcowej leucyny (SR-BI a 509) nie wchodził w interakcję z PDZK1 in vitro (24). W niniejszej pracy stwierdziliśmy, że SR-BI-509 nie jest zdolny do pośredniczenia w aktywacji eNOS przez HDL. Tak więc, PDZK1 lub pokrewne białko prawdopodobnie będzie kluczowe dla sygnalizacji przez SR-BI, prawdopodobnie przez działanie jako szkielet dla receptora w bliskim sąsiedztwie niższych kinaz, takich jak kinazy z rodziny Src, PI3K lub MAPK wymagane do aktywacji eNOS przez HDL (14). Badania są teraz uzasadnione, aby konkretnie ocenić zaangażowanie PDZK1 w śródbłonek lub alternatywnie zidentyfikować powiązane białko śródbłonkowe sprzęgające SR-BI z dalszymi cząsteczkami sygnałowymi. Po ustaleniu, że C-końcowy cytoplazmatyczny ogon SR-BI jest niezbędny do sygnalizacji przez HDL, przeprowadziliśmy eksperymenty, aby ocenić, czy ten region jest wystarczający do pośredniczenia w tych procesach.
[podobne: wirusowe zapalenie krtani, badanie kału na pasożyty, stężenie alkoholu we krwi kalkulator ]
[podobne: zst kolbuszowa, kolbuszowa dolna, wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie ]