Wiązanie cholesterolu, wypływ i domena oddziałująca z PDZ receptora zmiatającego BI pośredniczy w sygnalizacji inicjowanej przez HDL ad 7

Chimera składająca się z CD36 z C-końcową domeną cytoplazmatyczną SR-BI dodawana do C-końca (CD / SRCT, Figura 6) nie powodowała fosforylacji lub aktywacji eNOS, co wskazuje, że C-końcowa domena cytoplazmatyczna SR- BI nie jest wystarczający do indukowania sygnalizacji HDL. Jednakże chimera oparta na CD36 z C-końcowymi domenami transbłonowymi i cytoplazmatycznymi SR-BI (CD / SRCTMT, Figura 6) wykazała fosforylację i aktywację eNOS porównywalną do fosforylacji typu dzikiego SR-BI. Tak więc zarówno C-terminalne domeny transbłonowe, jak i oddziałujące z PDZ SR-BI są wymagane do sygnalizowania HDL. Ponadto, te obserwacje wskazują, że poziom wypływu cholesterolu indukowany przez CD36 jest wystarczający do pośredniczenia w sygnalizacji HDL, jeśli odpowiednie domeny SR-BI są obecne do przekazywania sygnału. Następnie zbadano podstawę dla C-końcowej domeny transbłonowej SR-BI do sygnalizacji. Funkcje białek wyczuwających sterol, takich jak reduktaza HMG-CoA, SCAP i NPC1, wiążą cholesterol z domenami transbłonowymi (25-30). Dlatego przetestowaliśmy hipotezę, że SR-BI wiąże również cholesterol błonowy, używając dobrze scharakteryzowanego, aktywowalnego, dającego się sieciować analogu cholesterolu, fotocholesterolu. Wykazano wiązanie fotocholesterolu do SR-BI, ale nie do CD / SRCT, a następnie ustalono, że C-końcowa domena transbłonowa SR-BI jest składnikiem białkowym, który wiąże cholesterol. Stwierdziliśmy również, że członek rodziny receptorów zmiatających B trzeciej klasy, LIMP-II, który jest wyłącznie rezydującym lizosomalnym białkiem błonowym, miał znikomą zdolność wiązania cholesterolu. Ponadto, SR-BI wykazywał większą zdolność do wiązania cholesterolu niż CD / SRCT lub LIMP-II, gdy kierowano go albo na błonę plazmatyczną, albo na błony lizosomalne. Obserwacja ta wskazuje, że wyjątkowa charakterystyka C-końcowej domeny transbłonowej SR-BI, a nie cechy specyficzne dla błony komórkowej, leży u podstaw wiązania cholesterolu SR-BI. Mechanizm (y), w którym C-końcowa domena transbłonowa SR-BI wiąże cholesterol, nie została jeszcze określona. Domena nie zawiera typowej sekwencji konsensusowej dla wiązania cholesterolu, jak istnieje w SCAP, reduktaza HMG-CoA i NPC1, w której wiele domen transbłonowych pośredniczy w procesie (25. 29, 40. 42). SR-BI również nie ma podobnej struktury drugorzędowej lub trzeciorzędowej z tymi białkami. Ponadto nowo odkryta domena wiążąca cholesterol SR-BI nie ma konsensusu rozpoznawania / interakcji aminokwasów interakcji cholesterolu stwierdzonego w obwodowym typie receptora benzodiazepinowego i w steroidogennym ostrym białku regulacyjnym (zależnym od STAR) transferu lipidów (START) sekwencje domeny (43, 44). Istnieje również wiele innych białek wiążących cholesterol, w tym synaptophysins i tetraspanins z niesklasyfikowanymi motywami wiążącymi cholesterol (45, 46). Szczegółowe badania mutagenezy będą teraz wymagane do wyjaśnienia dyskretnej domeny wiążącej cholesterol SR-BI. Istnieją dowody na to, że SR-BI może dimeryzować (47), a zatem C-końcowe domeny transbłonowe receptora mogą działać wspólnie, aby związać cholesterol. Ponadto mechanistyczny związek pomiędzy wiązaniem cholesterolu przez C-końcową domenę transbłonową i transdukcją sygnału jest obecnie nieznany. Ostatnie badania wykazały, że SCAP ulega zmianie konformacyjnej po dodaniu cholesterolu do błon retikulum endoplazmatycznego (25). Łącząc 3 wymogi sygnalizacji ujawnione w niniejszej pracy, a mianowicie wypływ cholesterolu, C-końcową domenę cytoplazmatyczną i C-końcową domenę transbłonową SR-BI, postulujemy, że zaburzenia związane z wiązaniem cholesterolu z SR-BI prowadzą do zmian konformacyjnych. (s), które modyfikują asocjację receptora z PDZK1 lub innymi białkami krytycznymi dla dalszego przekazywania sygnałów. Dodatkowe badania są teraz uzasadnione, aby przetestować te możliwości. Podsumowując, niniejsza praca pokazuje, że kombinacja wypływu cholesterolu, C-końcowa domena transbłonowa SR-BI, która wiąże cholesterol, oraz C-końcowa domena oddziałująca PDZ na SR-BI są niezbędne i wystarczające dla sygnalizacji inicjowanej przez HDL. Te obserwacje zapewniają mechanistyczne połączenie między HDL a modyfikacją funkcji komórek śródbłonka i najprawdopodobniej także innych typów komórek zaangażowanych w miażdżycę. Dodatkowo wskazują one, że SR-BI służy jako czujnik cholesterolu na błonie plazmatycznej. Dalsze prace w tym obszarze poprawią naszą podstawową wiedzę na temat działania HDL i podstawy w odniesieniu do ochrony przed rozwojem miażdżycy, w szczególności mechanizmów wykrywania cholesterolu. Metody Hodowla komórkowa i transfekcja
[patrz też: polskie towarzystwo ultrasonograficzne, kalendarz triathlon 2015, mleko z biedronki wycofane ]
[więcej w: uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego, zss kolbuszowa dolna, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi ]