Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 8

Sugerowano, że wirusy i dsRNA mogą wywoływać cukrzycę poprzez przedłużone wytwarzanie IFN-I, które promuje autoimmunologiczne odpowiedzi komórek T (30). Zgodnie z tą hipotezą, badania genetyczne na ludziach wykazały, że rzadkie allele MDA5, które są defektywne w produkcji IFN-I, korelują z ochroną przed rozwojem T1D (41. 44). W oczywisty sposób kontrastują z tymi badaniami, stwierdziliśmy, że upośledzenie wykrywania odpowiedzi EMCV-D i IFN-I u myszy, które nie mają TLR3 w komórkach krwiotwórczych powoduje cukrzycę. W tym przypadku jednak cukrzyca jest wywołana przez wirusy. uszkodzenie komórek, a nie autoimmunizacja zależna od limfocytów T. Ponieważ myszy, które były heterozygotyczne pod względem allelu WT MDA5, również rozwinęły hiperglikemię indukowaną EMCV-Dp, MDA5 prawdopodobnie zapobiega również cukrzycy indukowanej wirusem, chociaż nie można formalnie zademonstrować tego wniosku, ponieważ całkowity brak MDA5 spowodował szybkie indukowanie EMCV-D. śmiertelność przed rozwojem cukrzycy. Proponujemy, że odpowiedzi indukowane przez TLR3 i MDA5 nie są z natury diabetogenne i zamiast tego zależą od sekwencji patogenezy, która powoduje cukrzycę. W autoimmunologicznym T1D sensory dsRNA mogą być niewłaściwie stymulowane przez endogenne kwasy nukleinowe generowane przez apoptozę komórek lub martwicę lub przez infekcje wirusowe, które nie są ukierunkowane. komórki. Może to prowadzić do nadmiernego IFN-I, który wyzwala utajone autoreaktywne komórki T. Natomiast podczas zakażenia. wirusy komórkowe i zwrotne, osłabiona aktywność sensorów dsRNA, w szczególności TLR3 w komórkach hematopoetycznych, może prowadzić do stępionej odpowiedzi IFN-I, niekontrolowanej replikacji wirusa i cukrzycy. Co ciekawe, analiza tkanki trzustki od pacjentów z cukrzycą o niedawnym początku wykazała wyraźne wzorce histologiczne, które odzwierciedlały albo autoimmunologiczną albo wirusową patogenezę (56). Podczas gdy prawidłowe lub nadczynne polimorfizmy w ludzkim MDA5 predysponują do autoimmunologicznego T1D, hipofunkcjonalne polimorfizmy w TLR3 (i prawdopodobnie MDA5) mogą predysponować do podatności na cukrzycę indukowaną wirusem, pod warunkiem, że patogeny wyzwalające są obecne w środowisku (57). Metody Myszy i infekcje. Mda5. /. i Mda5 + /. (48), Tlr3. /. (51), DKO (51), CD11c-DTR (58), Irf3. /. (59) i Ifnb. /. (60) myszy zostały opisane wcześniej. Wszystkie myszy krzyżowano wstecznie z tłem C57BL / 6, co określono na podstawie kongeniczności prędkości (urządzenie rdzeniowe w Washington University Rheumatic Diseases). Mda5. /. myszy na tle genetycznym 129 / SvJ zostały opisane (48). Dopasowane do wieku myszy kontrolne zakupiono komercyjnie (Jackson Laboratories). Wszystkie myszy stosowane w tych doświadczeniach były płci męskiej, ponieważ samce myszy są bardziej podatne na cukrzycę indukowaną EMCV-D (odnośnik 45 i dane nieukazane). EMCV-D uzyskano od Johna Corbetta (University of Alabama, Birmingham, Alabama, USA) i pasażowano w komórkach L929. Infekcje wykonywano przy 1000 PFU na mysz za pomocą wstrzyknięcia ip. Wszystkie badania na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet Medycyny Weterynaryjnej Uniwersytetu Waszyngtońskiego. Generacja chimery BM. Myszy-biorców poddano napromienianiu a-10 10 Gy. Po nocnym odpoczynku myszy rekonstytuowano 5 x 106 komórek BM na mysz, które zebrano z kości udowych i piszczeli dorównujących dawcy dawców. Po 6 tygodniach zastosowano chimery do infekcji. Miana wirusa. Narządy z zakażonych zwierząt zamrażano w temperaturze ~ 80 ° C bezpośrednio po zbiorach. Następnie narządy zawieszono w ml DMEM (Invitrogen) i homogenizowano przez kulkowanie z kulkami 1,0 mm (produkty BioSpec). Homogenaty narządów rozcieńczono 1:10 w DMEM i testowano na miano wirusa w teście łysinek. Komórki L929 wysiewano na 6-studzienkowe płytki i infekowano 10-krotnymi rozcieńczeniami homogenatu tkankowego w dwóch powtórzeniach. Po 1-godzinnej inkubacji pożywki usunięto i studzienki nałożono na kompletne pożywki DMEM (DMEM z 10% FCS [HyClone], 10 mM HEPES [Invitrogen] i 50 jednostek / ml penicyliny / streptomycyny [Invitrogen] zawierające 1,5% agarozę SeaPlaque [Cambridge Biosciences]). Po 48 godzinach dodano drugą warstwę zawierającą 1,5% agarozy SeaKem (Cambridge Biosciences) i 0,01% czerwieni neutralnej (Sigma-Aldrich) w kompletnych pożywkach DMEM. Po 8 godzinach wizualizowano łysinki. Pomiary krwi / surowicy. Krew pobierano w określonych punktach czasowych po zakażeniu i odwirowywano w probówkach do oddzielania surowicy (BD) w celu wyizolowania surowicy, którą przechowywano w temperaturze <80 ° C. Stężenie troponiny w surowicy oznaczono metodą ELISA (Life Diagnostics Inc). Stężenia amylazy i lipazy w surowicy określano za pomocą oznaczeń biologicznych przez ośrodek uniwersytecki Uniwersytetu Waszyngtońskiego. Poziom glukozy we krwi mierzono za pomocą glukometru Ascensia Elite (Fisher) o stałej porze dnia, aby zminimalizować dobowe wahania. Test biologiczny IFN [hasła pokrewne: suplementy na wypadanie włosów, przychodnia ożarów mazowiecki, polskie towarzystwo ultrasonograficzne ] [więcej w: kolbuszowa dolna, wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, uzasadnienie wydłużenia etapu edukacyjnego ]