Wywołany przez czujnik IFN typ I IFN zapobiega cukrzycy wywołanej przez wirus komórek tropikalnych u myszy ad 9

Poziomy IFN w surowicy określono w teście biologicznym (60). W skrócie, komórki L929 inkubowano przez 24 godziny ze wzorcami lub próbkami, a następnie infekowano VSV-GFP przez 10 godzin. Komórki utrwalono i procent komórek GFP + oznaczony metodą cytometrii przepływowej zastosowano do obliczenia poziomów IFN w liniowym zakresie krzywej standardowej. Ta metoda dała wyniki podobne do wyników IFN-y ELISA (PBL, dane nie przedstawione), ale był bardziej czuły na niskie wartości IFN. Histologia. Narządy zebrano we wskazanych punktach czasowych po zakażeniu i skrawki tkanek przygotowano przez osadzenie w parafinie utrwalacza w formalinie lub zamrożenie w odczynniku OCT. W przypadku morfologii, wiele przekrojów na różnych poziomach wybarwiono dla H & E. W przypadku immunohistochemii, skrawki o ustalonej tkance wybarwiono przy użyciu pierwotnych przeciwciał przeciwko następującym antygenom: EMCVpol (Ms, rozcieńczenie 1: 1500, dostarczone przez Ann Palmenberg, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin, USA), CD3 (Rb mab, klon SP7, rozcieńczenie 1: 100, Thermo Scientific), MDA-5 (Helicard, mysie poliklonalne Rb, rozcieńczenie 1: 600, Alexis Biochemicals), Iba-1 (Rb, rozcieńczenie 1: 500, Wako Chemicals), aktywna kaspaza-3 (Rb, rozcieńczenie 1: 600, R & D), Synaptophysin (Rb mab, klon SP11, rozcieńczenie 1: 100, Thermo Scientific) i CDllc (chomik, klon HL3, rozcieńczenie 1:10 inkubacja przez noc, BD Biosciences. Pharmingen). Reaktywność ujawniono przy użyciu systemu detekcji Rb lub Ms EnVision z HRP (Dako), a następnie diaminobenzydyny (DAB) lub z użyciem biotynylowanego drugorzędowego przeciwciała przeciwko chomiczej kozie (1: 150; Vector Laboratories), a następnie z koziego zestawu HRP-Polymer (Biocare Medical) i DAB dla barwienia CD11c. W przypadku podwójnego barwienia, po zakończeniu pierwszej reakcji, drugie przeciwciało wizualizowano stosując układ detekcji Rb połączony z Mach 4 (Biocare Medical), a następnie Ferengi Blue (Biocare Medical). Barwienie anty-TLR3 (szczur, klon 11F8.1B7, rozcieńczenie 1: 200, dostarczone przez David Segal, National Cancer Institute, Bethesda, Maryland, USA) przeprowadzono na 5-mikronowych kriostacie / zamrożonych skrawkach i opracowano z zastosowaniem króliczych anty-szczurzych IgG. mysz Adsorbowane biotynylowane przeciwciało (rozcieńczenie 1: 200, Vector Laboratories), a następnie streptawidyna HRP i DAB jako chromogen. Barwienie anty-MDA5 przeprowadzono jak opisano wcześniej (51). Fotomikrografię uzyskano za pomocą cyfrowej kamery DP-70 Olympus zamontowanej na mikroskopie Olympus BX60. Statystyka. Istotność statystyczną obliczono za pomocą testu t-Studenta dwustronnego dla indywidualnych porównań lub testu logarytmicznego dla badań przeżycia. Materiały uzupełniające Zobacz Dodatkowe dane Podziękowania Chcielibyśmy podziękować kilku współpracownikom za hojne datki odczynników: Richard Flavell i Lena Alexopolou za Tlr3. /. myszy, Tadatsu Taniguchi dla Irf3. /. i Ifnb. /. myszy, Ann Palmenberg dla przeciwciała anty-EMCVpol, David Segal (National Cancer Institute) dla przeciwciała anty-TLR3 i John Corbett dla zapasu wirusa EMCV-D. Suellen Greco z Washington University School of Medicine, Department of Comparative Medicine, udzielił pomocy w sekcji zwłok zainfekowanych zwierząt. Konwencję prędkości przeprowadzono w ośrodku chorób reumatycznych na Washington University. Projekt ten był wspierany przez Fundację Juvenile Diabetes Research Foundation (JDRF) 24-2007-420 (dla M. Colonny) i NIH przyznaje DK058177 i P60DK20579 (na rzecz ER Unanue). SA McCartney był wspierany przez National Research Service Award (NRSA) numer F30HL096354 z National Heart, Lung and Blood Institute (NHLBI) i T32DK007296 z National Institute of Diabetes and trawiennego i nerek (NIDDK). Cristina Rossini jest wspierana przez Fundację Beretta (Brescia, Włochy). Przypisy Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J Clin Invest. 2011; 121 (4): 1497. 1507. doi: 10.1172 / JCI44005.
[patrz też: kolbuszowa dolna, wydłużenie etapu edukacyjnego uzasadnienie, krem pod oczy z peptydami ]
[hasła pokrewne: zss kolbuszowa dolna, instytucje zajmujące się pomocą dla młodzieży z problemami rodzinnymi, niepokój manipulacyjny ]